月季組織培養(yǎng)技術(shù)

2008/6/30 15:30:56

一、培養(yǎng)意義 　　
月季屬薔薇科薔薇屬多年生草本植物，每年多次開花，而且香味怡人，在觀賞植物中地位很高。另一大優(yōu)點(diǎn)是分布極廣，適應(yīng)性強(qiáng)，栽培容易。使得月季無愧于“花中皇后”之美譽(yù)，古今中外文人墨客詠嘆月季的佳作，不勝枚舉。多倫縣就是一個月季之鄉(xiāng)，但品種比較單一，更新?lián)Q代緩慢。隨著組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用，多倫縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心于2000年11月引進(jìn)組織培養(yǎng)全套設(shè)備，成功培育了大量優(yōu)質(zhì)月季組培苗，填補(bǔ)了市場空白，對加速新老品種更新?lián)Q代，迅速普及名優(yōu)新品種起到了重要作用。 　　
二、培養(yǎng)程序 　　
(一)無菌培養(yǎng)的建立 　　
(1)選條 　　
從中國科學(xué)院、中國農(nóng)科院等一級科研機(jī)構(gòu)引進(jìn)6個月季優(yōu)良品種，分別是“紅雙喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金絲鳥”。選取生長健壯的當(dāng)年生枝條，用飽滿而未萌發(fā)的側(cè)芽作為外植體。以枝條中段芽最好，因?yàn)榻臃N后，中段芽第5天左右就能萌發(fā)，而基部和梢部的芽往往遲至15天才萌發(fā)。 　　
(2)培養(yǎng)基的配制 　　
整個培養(yǎng)過程都可用MS培養(yǎng)基，誘導(dǎo)芽萌發(fā)所加的植物激素只需要BA一種即可，每升用0.3～1.0mg，6個品種均適用，只是萌發(fā)遲早有些差別。 　　
(3)清洗外植體 　　
采回的枝條切去葉，再剝?nèi)ジ皆谇o上的葉柄及皮刺，先整段用洗手刷沾濃洗衣粉水仔細(xì)刷洗，再用自來水沖洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一個側(cè)芽，裝入消毒過的培養(yǎng)皿，放在超凈工作臺上，打開紫外燈，做表面滅菌30分鐘。 　　
(4)消毒與接種 　　
在超凈工作臺上，用飽和漂白粉上清液作表面滅菌25～30分鐘，滅菌時間快到時，即傾去滅菌溶液，用無菌水涮洗數(shù)次，無菌紗布吸干莖段外表水分，按無菌操作要求，接種到小試管里，從芽萌發(fā)到芽長到1厘米左右需要2～3周。 　　
(5)培養(yǎng) 　　
培養(yǎng)溫度21℃最好，最高不超過25℃，有晝夜溫差，光照10～12小時/天，光強(qiáng)800～1200LX。 　　
(二)繼代增殖 　　
(1)將上述無菌芽從原莖段上切下，轉(zhuǎn)接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培養(yǎng)基上，促使嫩莖長出更多的側(cè)芽，原莖段棄去。繼代增殖培養(yǎng)基每升用蔗糖30克。 　　
(2)5周后，“紅雙喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金絲鳥”達(dá)15倍。 　　
(3)每5～6周做一次繼代增殖，繼代前先制備好培養(yǎng)基，然后在無菌操作條件下，將月季嫩莖切成1～2節(jié)一段，投入新鮮的增殖培養(yǎng)基上，月季小苗就會按幾何級數(shù)增殖起來，也可以將大苗轉(zhuǎn)入到生根培養(yǎng)基上。 　　
(4)壯苗培養(yǎng) 　　
①對增殖倍率高的品種，所增殖的嫩莖很細(xì)弱，要求進(jìn)行一次壯苗培養(yǎng)，以取得適合生根和今后移栽的苗子。壯苗培養(yǎng)的培養(yǎng)基為：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特別強(qiáng)調(diào)繁殖速度，也可以一直使用這種培養(yǎng)基，以壯苗為主，增殖為輔，使增殖與壯苗合為一步。
②培養(yǎng)條件。光照10～12小時/天，光強(qiáng)800～1800LX，溫度20～23℃，最高24～26℃。 　　
(5)生根與移栽 　　
月季嫩芽生長到一定長度時，就應(yīng)切割下來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。切下的嫩芽長度以2～3厘米為宜，讓幼苗基部傷口愈合，已長出根原基，幼根尚未長出，即出瓶種植。這種方法不會損傷根系，移栽速度快，成活率高。 　　
(a)以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，配方為MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上無根嫩莖，經(jīng)2周左右出現(xiàn)根原基，幼根尚未長出即出瓶種植。 　　
(b)移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的瓊脂培養(yǎng)基，再種植到粗沙+園田土(1：3)介質(zhì)中，總的原則是疏松透氣，有一定的保水、保肥能力。種植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完畢澆透水，并用0.1％的百菌清、多菌靈或甲基托布津等噴霧保苗，能顯著提高成活率。 　　
(c)移栽后管理。移栽后需保持相對濕度85％以上，在溫室、拱棚中移栽，覆好遮蔭網(wǎng)，一般成活率都比較高，并注意通風(fēng)和溫度管理。4～6周后，須做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯種1苗，再經(jīng)4～6周，地上、地下部分都充分生長，有些植株還能開花，此時即可出售，或上盆種植，利于觀賞。 　　
(d)移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，視苗大小，濃度逐漸由0.1％提高到0.3％左右，施用種類有復(fù)合肥、尿素、磷酸二氫鉀，MS培養(yǎng)液等，通常每7～10天噴一次殺菌劑，如百菌清等保苗，也可結(jié)合噴藥施肥，以減少管理用工。試管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，須注意除草、施肥、防治病蟲害，及時掐去頂芽，尤其是花蕾，以促進(jìn)側(cè)芽的生長，促使早日壯大。 　　
三、影響月季增殖的因素 　　
1.BA用量及側(cè)芽在莖段上的位置對側(cè)芽發(fā)育的影響。用“和平”品種月季的枝條，均等分為6段，取每段的一個側(cè)芽培養(yǎng)在無激素的MS基本培養(yǎng)基上，23天后可見接近枝條最頂端和緊挨著枝條基部的芽發(fā)育最慢，而枝條中部的芽發(fā)育比較快。 　　
在不同濃度BA的MS培養(yǎng)基上，BA含量為0.03～0.3毫克/升的培養(yǎng)基，促進(jìn)“皇冠”“彩云”側(cè)芽的發(fā)育，如果BA超過O.3mg/L，則延遲芽的發(fā)育，但對于莖段中部的芽影響較小。 　　
2.摘心對莖增殖的影響。在繼代培養(yǎng)的接種操作時，切去嫩芽的頂芽后，再轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)基上，對嫩芽增殖有很大的促進(jìn)作用。 　　
3.赤霉素的影響。試用了赤霉素，其濃度為0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)所有濃度都抑制莖增殖，隨著其濃度增高，莖增殖數(shù)下降，赤霉素濃度增加，還出現(xiàn)細(xì)長的嫩莖和發(fā)育不全的葉子，畸型植株等。 　　
4.嫩芽長度對形成多芽苗的影響。莖尖在1～10毫米長短時，對形成多芽苗最有效，不但百分率高，而且每個莖段的側(cè)枝數(shù)也比較多，切割過短或過長都對莖的增殖不利，芽苗形成較少。切割過長會表現(xiàn)出葉子衰老等不利的現(xiàn)象，最適宜的莖尖長度為6～10毫米。 　　
5.每次繼代培養(yǎng)所需時間對嫩莖增殖的影響。在MS+BA3+IAA0.3的培養(yǎng)基上，“紅雙喜”月季的培養(yǎng)時間為28天，繼代一次較好，超過28天，莖的數(shù)目已不再增加。 　　
6.MS配方和無機(jī)鹽濃度。試驗(yàn)證明，全量的MS無機(jī)鹽對莖增殖效果最好。 　　
四、影響月季生根和移栽成活率的因素 　　
1.不同生長素種類和濃度對月季生根和移栽成活率的影響。以“彩云”為材料，用NAA、IAA兩種不同濃度的生長素做生根試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用NAA誘導(dǎo)生根和提高移栽成活率效果最好，濃度為100ppm為宜，發(fā)現(xiàn)以IAA誘導(dǎo)生根和提高移栽成活率效果并不理想，其濃度只能在1mg/L以下，超過時對生根的促進(jìn)作用已不顯著，反而大幅度降低移栽成活率。 　　
2.無機(jī)鹽濃度和含糖量對月季生根的影響。采用較低濃度的無機(jī)鹽對月季生根效果較好。但糖濃度不可降低。否則削弱苗的生長勢。試驗(yàn)證明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。 　　
3.瓊脂用量及對生根的影響。瓊脂粉用量在4～5克/升的范圍內(nèi)對生根效果影響沒有顯著差別，以4克/升稍優(yōu)，用最小不利于凝固，用量大培養(yǎng)過硬不利于扎根。 　　
五、結(jié)論 　　
用組織培養(yǎng)的方法生產(chǎn)月季試管苗不僅生產(chǎn)周期短，而且繁殖倍數(shù)高，周年均可生產(chǎn)，年可生產(chǎn)月季試管苗50萬株，經(jīng)濟(jì)效益，社會效益都很可觀，建議業(yè)界同仁能夠關(guān)注此項(xiàng)事業(yè)。

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