抗寒月季組培快繁技術(shù)研究

2010/5/9 10:28:34

摘要：以抗寒月季帶腋芽莖段為外植體。結(jié)果表明：在MS+6-BA1.0~3.0mg/l+NAA0.10mg/l培養(yǎng)基上進行起始培養(yǎng)，其腋芽生長到2~3cm時轉(zhuǎn)接到MS+6-BA2.0-3.0mg/l+NAA0.1mg/l的培養(yǎng)基上進行繼代增殖培養(yǎng),30天其增殖倍數(shù)在3~4倍以上,且長成的芽苗比較粗壯;增殖后的芽苗在1/2MS+NAA0.5~1.0mg/l或IBA0.5~0.8mg/l的培養(yǎng)基上培養(yǎng),根系生長良好,30天小苗發(fā)根率達90%以上,經(jīng)煉苗后移栽在以草碳和珍珠巖(體積比1:1)基質(zhì)中,成活率達85%以上,當(dāng)小苗長到10cm左右移植于田間栽培,60~90天后可陸續(xù)現(xiàn)蕾開花.
關(guān)鍵詞:抗寒月季；組織培養(yǎng)；快速繁殖；帶腋芽莖段
月季是薔薇屬的木本花卉,有“花中皇后”的美譽,深受人們的喜愛.為我國十大名花之一,在我國有30多個城市將其選為市花�？购�月季是近幾年選育出來的能夠適應(yīng)北方寒冷氣候特點的新的月季品種,以其花大,色艷、花期長被北方園林綠化彩化中廣泛應(yīng)用，但由于其繁殖以扦插繁殖為主，繁殖速度慢，滿足不了生產(chǎn)發(fā)展的需要，而組織培養(yǎng)可在短期內(nèi)獲得大量的優(yōu)良種苗，為此，我們于2003~2006年開展了抗寒月季組培快繁的研究工作。
1材料與方法
1.1材料
試驗所用的材料為長春市園林科學(xué)研究所抗寒月季基地抗寒月季新品種。
1.2方法
1．2．1外植體的準(zhǔn)備
取生長健壯優(yōu)良母株上帶有腋芽的嫩莖，摘除葉片和嫩刺，用自來水沖洗干凈后，用浸有75%的酒精棉球擦拭表面5~10S，剪成3~5cm左右的莖段，在超凈工作臺上，用0.1%升汞溶液消毒10~12分，無菌水沖洗3~5次，再用無菌濾紙吸干表面水分，切成帶有1個或2個腋芽的莖段接種到培養(yǎng)基中。
1．2．2腋芽的分化與增殖
把外植體分別接種于添加6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基上進行起始培養(yǎng)，誘導(dǎo)腋芽萌發(fā)建立無菌快速繁殖無性系，再將無菌小苗剪切成1~2cm左右的小段接種到添加不同6-BA和NAA的MS培養(yǎng)基中進行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時間后對小苗的增殖與生長情況進行觀察統(tǒng)計分析，培養(yǎng)基含30g/l糖、8g/l瓊脂、pH值5.8~6.5、培養(yǎng)溫度（25+-3），每天光照為11~12小時，光照強度1000~1500LX。
1．2．3生根與移栽
將增殖后長勢旺盛、節(jié)間紳長適度的無根小苗轉(zhuǎn)接到1/2MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，30天后觀察生根情況。
生根后的試管苗在常溫下煉苗5~7天，移栽到草碳+珍珠巖（體積比為1∶1）的基質(zhì)中，待成活后小苗高達10cm左右移到田間種植。
2結(jié)果與討論
2．1腋芽分化
將外植體接種到MS+2.0mg/l6-BA+0.1mg/lNAA的培養(yǎng)基上培養(yǎng)7天后，大部分外植體開始萌動，10天腋芽膨大明顯，隨后長出嫩芽形成無根芽從。
為選擇出不同質(zhì)量濃度6-BA對誘導(dǎo)腋芽分化的影響，以MS為基本培養(yǎng)基配制7種附加不同質(zhì)量濃度（分別為0.10.51.01.52.03.04.0）的6-BA與0.1mg/lNAA配組的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基,每組培養(yǎng)基接種40個外植體,培養(yǎng)40天觀察其腋芽分化情況（見表1）。
表1表明,月季腋芽分化率與培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度呈拋物線關(guān)系,6-BA由0.1增加至3.0時腋芽分化率明顯提高,以3.0為最高,腋芽分化率達77.5%;當(dāng)6-BA的質(zhì)量繼續(xù)增加時,其腋芽分化率則明顯下降;6-BA質(zhì)量濃度為0.1時其腋芽分化率最低,僅為7.5%;6-BA質(zhì)量濃度為5.0時,其腋芽分化率只為15%,可見,培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為1.5~3.0時有利于誘導(dǎo)腋芽分化,尤其以2.0~3.0時為最佳。
2.2繼代增殖培養(yǎng)
取自同一種培養(yǎng)基上長勢、大小一致的繼代培養(yǎng)芽和莖段，同時接種到不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA的MS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30天后進行觀察并統(tǒng)計結(jié)果（見表2）。
由表2可以看出，在NAA質(zhì)量濃度相同而6-BA質(zhì)量濃度不同的處理中，隨著6-BA濃度的升高（1.5~3.0）芽苗的增殖倍數(shù)也相應(yīng)提高，NAA為0.05~0.1、6-BA為3.0的處理芽苗增殖倍數(shù)高達6.6~6.8倍；可見，培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度為3.0、NAA質(zhì)量濃度為0.05時為最佳的誘導(dǎo)腋芽分化的處理組合。
2．3生根培養(yǎng)
無菌芽苗在分化與增殖培養(yǎng)基中只誘導(dǎo)地上部分，既不斷地分枝增殖，曾多次出現(xiàn)現(xiàn)蕾、開花現(xiàn)象，但均不易生根。因此，將原來培養(yǎng)基中的大量元素減半（既1/2MS），并去除BA進行根的誘導(dǎo)。結(jié)果在無菌苗根的誘導(dǎo)過程中，生長素的種類和使用濃度起決定性作用，為此對不同種類的生長素NAA、IBA、A、IAA的根效應(yīng)作對比試驗，結(jié)果表明，NAA、IBA對抗寒月季無菌苗誘根效應(yīng)明顯優(yōu)于IAA，但兩者之間差異不明顯，用IAA進行根的誘導(dǎo)，芽苗基部長出較多的愈傷組織，發(fā)根率低，且發(fā)根量少，移栽成活率下降，這可能是因為生長過多的愈傷組織影響根系維管束的發(fā)育所致，為為了解NAA和IBA的適宜質(zhì)量濃度，進行了NAA和IBA的質(zhì)量濃度試驗，分別設(shè)置0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、1.0、1.5等7種質(zhì)量濃度進行比較，培養(yǎng)30天后觀察根系生長情況，表3表明，以1/2MS（大量元素用量減半）+NAA和1/2MS（大量元素用量減半）+IBA培養(yǎng)基對月季根的誘導(dǎo)效果均較為理想，而且濃度都在0.3-0.75mg/l范圍內(nèi)最為適合，但以NAA為最佳。其中NAA生根率最高達92%，移栽成活率高達89%，IBA的生根率也高達90%，移栽成活率達87%。
將小苗接種到上述培養(yǎng)基中10天后其基部傷口基本愈合，18天則長出許多小白根，培養(yǎng)30天發(fā)根率均達90%以上，且長有3條以上，長度達2.0cm以上白根的占80%以上。
2．4煉苗移栽
在生根培養(yǎng)基中，無菌苗生長迅速，植株逐漸健壯起來，其根系生長尤為迅速，在多數(shù)根系長達1.0cm，其根尖仍保持旺盛生長狀態(tài)，此時即可進入過度栽培（煉苗）階段，移栽前先將瓶苗移出恒溫培養(yǎng)室，在常溫下置于較強散射光中煉苗7天，打開瓶蓋后繼續(xù)煉苗2~7天，然后小心取出放入清水中清洗干凈，注意少傷根，移栽到以草碳土+珍珠巖（體積比1∶1）的基質(zhì)中，澆透水并覆蓋塑料膜，保持相對濕度85~90%，溫度15~25℃，10天后逐漸揭膜煉苗，15~20天可將塑料膜全部揭除，并澆施營養(yǎng)液補充營養(yǎng)，其成活率一般可達70%以上，待小苗長至10~15cm左右時，就可移植到田間定植。
參考文獻
［1］李正平.月季試管繁殖和移栽中幾個因素的研究［J］.園藝學(xué)報，1988，15（2）：131

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