杜鵑花植物的組培技術(shù)

2017/8/16 21:05:43

杜鵑花組織培養(yǎng)，通常使用的外植體為莖尖、莖節(jié)和花蕾等。因花蕾的分化較為困難，周期長(zhǎng)；莖尖的取材受到一定限制，故國(guó)內(nèi)多采用莖節(jié)為初代培養(yǎng)的外植體。
???殺菌處理時(shí)，殺菌能力較強(qiáng)的升汞（氯化汞）易造成外植體材料的褐變死亡，不宜使用。試驗(yàn)表明，采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5％的次氯酸鈉液作為滅菌劑，效果較好，處理時(shí)間為15至20分鐘。為加強(qiáng)滅菌效果，還可加入1％的克菌丹或0.1％的吐溫－20（山梨糖醇）配合使用。材料滅菌前的預(yù)處理，通常采用70％酒精浸泡，不超過(guò)30秒。此外，用中性洗滌劑進(jìn)行材料的預(yù)處理，亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為：洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70％酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5％次氯酸鈉浸泡15分鐘,滅菌水漂洗3次，每次1分鐘。如此，可將外植體污染率降低到15％以下。
???杜鵑花組培所用培養(yǎng)基，為Andeson改良MS培養(yǎng)基：將MS培養(yǎng)基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1／4，取消了碘化鉀成分，鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產(chǎn)于高山酸性土壤，培養(yǎng)基的pH值宜為5.0至5.4。培養(yǎng)室溫度25℃，光照強(qiáng)度3000勒克斯，光照時(shí)間12至14小時(shí)。
???杜鵑花在誘芽培養(yǎng)中使用的激素較一般植物有異，需要活性較強(qiáng)的細(xì)胞激動(dòng)素類(lèi)物質(zhì)，才能達(dá)到滿(mǎn)意的效果。試驗(yàn)表明，使用ZT的誘芽效應(yīng)最為顯著；添加KT的處理幾乎無(wú)叢芽或側(cè)芽發(fā)生，僅是原莖尖的伸長(zhǎng)；而選用6－BA處理，則導(dǎo)致培養(yǎng)材料的褐變加劇，效果反不如對(duì)照。此外，在其后的增殖培養(yǎng)中，杜鵑花對(duì)細(xì)胞激動(dòng)素種類(lèi)的要求，仍以添加ZT為好。
???國(guó)外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細(xì)胞激動(dòng)素，效果較ZT好。但從經(jīng)濟(jì)的角度考慮，仍推薦使用ZT。
???二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養(yǎng)
???杜鵑花初代誘芽培養(yǎng)，NAA濃度不得超過(guò)0.1mg／L，ZT用量的增大對(duì)誘芽效應(yīng)有明顯促進(jìn)作用。但提高ZT濃度時(shí)，NAA濃度不宜同步增加，ZT／NAA值較大為好。從經(jīng)濟(jì)培養(yǎng)的意義出發(fā)，初代培養(yǎng)的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）為宜，培養(yǎng)1個(gè)月左右時(shí)，誘芽率即可達(dá)100％，誘芽系數(shù)6.5。

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