1培養(yǎng)條件
(1)啟動培養(yǎng)基:1/3MS+6BA1.0mg/l(單位下同)+IBA0.02+3%蔗糖;(2)增殖培養(yǎng)基:MS+6BA1.2+IBA0.2+3%蔗糖;(3)生根培養(yǎng)基:1/2MS+NAA0.3+1.5%蔗糖。以上培養(yǎng)基均加入6.0g/l的倍力凝(一種微生物多固化劑),培養(yǎng)溫度為25±2℃,pH5.8~6.2,光照度2000Lx,每日10~12h。
2材料的選擇與消毒
選取帶腋芽的莖段或2~4cm的嫩梢為外植體,用毛刷蘸洗衣粉輕輕刷洗后用水沖凈,置超凈工作臺上用75%酒精溶液浸泡15s,無菌水沖洗2次,用0.1%HgCl2滅菌1~2min,無菌水沖洗3~5次。
3接種與增殖
消毒完畢,在無菌條件下用無菌濾紙將外植體表面的水分吸干接種于啟動培養(yǎng)基(1)上,置于光照培養(yǎng)室中進行培養(yǎng)。7d后開始生長,當(dāng)新梢長2~3cm時,將其剪下接人培養(yǎng)基(2)中進行增殖培養(yǎng),10d后,無菌苗基部開始產(chǎn)生叢生芽,每25~30天繼代1次。
4生根與煉苗
當(dāng)組培苗增殖到一定數(shù)量時,將3cm高的芽從基部剪下,接種于生根培養(yǎng)基(3)上進行生根培養(yǎng),7d后開始有根產(chǎn)生,20d后,苗基部長出4~5條根,根長0.6~1.5cm,生根率達90%,此時可煉苗,將瓶苗移至溫室下煉苗3~5天,使小苗健壯。打開瓶口,繼續(xù)煉苗2~3天,即可移栽。
5移栽
先洗去附著在根部的培養(yǎng)基,在1000倍的多菌靈溶液中浸泡1~2min,立即栽入經(jīng)0.1%高錳酸鉀消過毒的垤石或河沙中,覆膜保濕,溫度控制在25~30%,空氣相對濕度在85%以上。待新根長出后,逐漸揭去薄膜,直至全部去除,此時可將苗移入裝有腐殖土的營養(yǎng)缽中,移栽成活率在95%以上。