夜香樹(shù)的組織培養(yǎng) 

2013/7/23 7:59:34

1叢生芽誘導(dǎo)

這一階段主要是誘導(dǎo)芽，在外植體初代培養(yǎng)8-10d．部分外植體芽開(kāi)始膨大。14d后相繼出現(xiàn)新芽；培養(yǎng)24d后新芽可長(zhǎng)至2．0~3．8cm，生長(zhǎng)情況見(jiàn)表l。

從表l可以看出。Ⅱ、Ⅳ這三個(gè)處理均有較高的出芽率．其中以處理Ⅱ即MS+6一BA0．5+NAA0．1芽萌發(fā)情況最好．芽粗壯．葉大且舒展．平均伸長(zhǎng)3．5cm；處理I不添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，長(zhǎng)勢(shì)較整齊，但芽的萌發(fā)較慢，新芽葉片小且蜷縮．平均伸長(zhǎng)1．5cm;處理Ⅲ芽萌發(fā)情況不好，玻璃化情況嚴(yán)重。處理Ⅳ芽萌發(fā)情況亦可，平均伸長(zhǎng)2．7cm，但葉片小，不舒展，長(zhǎng)勢(shì)較弱。因此，Ⅳ雖有較高的出芽率，但新芽長(zhǎng)勢(shì)不好。不適宜作為繼代材料使用。處理Ⅱ既有較高的出芽率且新芽長(zhǎng)勢(shì)又好，是較適宜的初代培養(yǎng)基。

2芽分化誘導(dǎo)培養(yǎng)

芽分化增殖過(guò)程是夜香樹(shù)離體快速繁殖培養(yǎng)過(guò)程中一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié)。獲得無(wú)菌材料后，是否能順利進(jìn)入快速增殖培養(yǎng)階段。篩選出符合要求分化增殖培養(yǎng)基是此階段的主要任務(wù)．對(duì)于離體快速繁殖最終是否能應(yīng)用于生產(chǎn)時(shí)間．受兩個(gè)關(guān)鍵因素制約：(l）芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環(huán)節(jié)，直接關(guān)系到能否商業(yè)化生產(chǎn)；(2）有效芽所占比例，指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時(shí)芽的質(zhì)量決定了芽的利用率的高低，所以選擇一個(gè)增殖率高且有效芽多的增殖培養(yǎng)基是離體快速繁殖的關(guān)鍵。

將第一階段培養(yǎng)成功的芽切下，接種于分化增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，6一BA、IBA分別設(shè)了5個(gè)梯度，共50個(gè)處理，培養(yǎng)25d。對(duì)生長(zhǎng)情況（表2）分析可知，芽增殖用6-BAO.5mg/L、IBAO.2mg/L時(shí)，芽增殖倍數(shù)為7.5，芽苗生長(zhǎng)正常，節(jié)間略長(zhǎng)，但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數(shù)在5一6的分化增殖培養(yǎng)基，既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標(biāo)準(zhǔn)的處理為6-BA0.4~0.5mg/L，IBAO.2一0.3mg/L。

3生根培養(yǎng)

由表3分析可知，經(jīng)過(guò)30d的生根培養(yǎng)，不同濃度IBA對(duì)夜香樹(shù)生根率、生根數(shù)均有不同程度的影響，其中以IBAO.3mg/L時(shí)生根情況最好，生根率高，發(fā)根早。有4一5條側(cè)生根。當(dāng)IBAO.5mg/L時(shí)發(fā)現(xiàn)，有些根生長(zhǎng)在植株基部愈傷組織上，根粗壯，側(cè)根多，但從苗瓶中取出移栽時(shí)根容易脫落，成活率不高。實(shí)驗(yàn)還表明，夜香樹(shù)生根快慢與生根質(zhì)量不僅受培養(yǎng)基的影響，而且與生根材料的健壯程度與木質(zhì)化程度有密切關(guān)系。粗壯、半木質(zhì)化材料生根快，主根與側(cè)生根發(fā)育好（表3）。

4煉苗與移栽

夜香樹(shù)試管苗在組培室內(nèi)濕度比較恒定、無(wú)菌條件下產(chǎn)生出來(lái)的，因此，沒(méi)有經(jīng)過(guò)抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗，當(dāng)移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會(huì)受到各種不利因素的影響，所以，在種植后7d應(yīng)及時(shí)噴灑殺菌劑，每隔7一10d噴1次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液，濃度掌握在l000~1500倍為宜。

生根培養(yǎng)28d后，當(dāng)瓶?jī)?nèi)組培苗長(zhǎng)到scm左右時(shí)，將生根的瓶苗移人自然光下光培養(yǎng)7d后揭膜。為減少取苗時(shí)對(duì)根系的傷害，在拔苗前適當(dāng)往瓶中加人一些自來(lái)水浸泡l一2h，將苗拔出后用自來(lái)水沖去附著的根部的瓊脂，移栽到用蒸汽消毒過(guò)的細(xì)煤渣或細(xì)沙中，成活率可達(dá)92腸以上。在煉苗床上培養(yǎng)15~20d移人大田或容器中。

苗期管理

移植后每天淋水兩次，淋水時(shí)注意不要用膠管或噴槍直射、直淋，最好用噴霧方式淋水。因?yàn)樵嚬苊缬仔�，直射、直淋都�?huì)造成植株歪斜。生長(zhǎng)初期7d噴施氮肥兩次，21d后加少許磷、鉀肥，棍合施用�；ê髮⒖葜�和過(guò)密枝條剪除．對(duì)徒長(zhǎng)進(jìn)行截短處理。常見(jiàn)病害有輪紋病，可用50％甲基托布津可濕性粉劑500倍液噴灑。蟲害有介殼蟲和粉虱，用50％殺螟松乳油1000倍液噴殺。

結(jié)論

Ms+6-BAo.5mg/L+NAA0.lmg/L＋蔗糖3.0%＋瓊脂0.6％是夜香樹(shù)較為理想的誘導(dǎo)芽萌發(fā)的培養(yǎng)基；芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L，IBA0.2mg/L＋蔗糖3%＋瓊脂0.6%，繼代培養(yǎng)25d增殖系數(shù)可達(dá)7.5，且生長(zhǎng)健壯。

在1/2MS+IBAO.3mg/L十蔗糖0.15％十瓊脂0.6％的培養(yǎng)基上，夜香樹(shù)生根效果較好，生根率達(dá)到100%，平均根數(shù)為5.7。在夜香樹(shù)移栽煉苗的過(guò)程中要嚴(yán)格控制空氣相對(duì)濕度，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)夜香樹(shù)瓶苗極易失水皺縮，煉苗前10d空氣相對(duì)濕度都應(yīng)該保持在80％以上，最好是通過(guò)扣玻璃瓶或塑料薄膜來(lái)保持濕度。

夜香樹(shù)的花香過(guò)于濃郁，近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺(jué)。故只可在公園或庭院的空曠處種植，且數(shù)量不宜過(guò)多過(guò)密。

討論

在試管苗生根培養(yǎng)中，耗費(fèi)了大量的時(shí)間和培養(yǎng)空間，而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無(wú)菌操作的步驟，提高了培養(yǎng)空間，又簡(jiǎn)化了組織培養(yǎng)程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了繁殖系數(shù)，能進(jìn)一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項(xiàng)值得研究的技術(shù)之一。

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