美國(guó)金鐘連翹組培快繁技術(shù)的研究

2012/9/11 15:17:19

美國(guó)金鐘連翹
美國(guó)金鐘連翹為木犀科連翹屬的半常綠灌木，是連翹和金鐘花的雜交種，性狀集中金鐘和連翹優(yōu)點(diǎn)，早春滿枝金黃，艷麗可愛(ài)，生長(zhǎng)期枝條拱形展開(kāi)，尤以晚秋冬初翠綠欲滴，形成一道亮麗的風(fēng)景線，近年來(lái)在園林中廣為應(yīng)用[1]。美國(guó)金鐘連翹多以扦插法繁殖，存在繁殖率低、苗木質(zhì)量差、不整齊等不利因素，極大地限制了這一優(yōu)良品種在園林中的應(yīng)用規(guī)模。利用組培快繁技術(shù)對(duì)美國(guó)金鐘連翹進(jìn)行快速繁殖，可在短期內(nèi)生產(chǎn)出大量整齊、均勻的健壯植株，并有利于種質(zhì)資源的保存、優(yōu)良品種的應(yīng)用與推廣，以及為基因克隆和生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因植株做準(zhǔn)備材料[2]。
　　
　　1材料與方法
　　
　　1.1材料
　　供試材料為從南京中山植物園引種的美國(guó)金鐘連翹。
　　
　　1.2方法
　　1.2.1外植體的處理。選擇生長(zhǎng)健壯、潔凈并且無(wú)病蟲(chóng)害、當(dāng)年生長(zhǎng)的植株。剪取帶腋芽的莖段切成長(zhǎng)1.5cm的切段，在流水下沖洗2~5h，用飽和漂白粉液浸泡25min，在超凈工作臺(tái)上用0.1%的HgCl2溶液浸泡5min，無(wú)菌水沖洗5次后接種。
　　1.2.2增殖培養(yǎng)。在MS+NAA 0.1mg/L的培養(yǎng)基中，分別加入0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.5mg/L的6-BA；在MS+6-BA 1.0mg/L的培養(yǎng)基中，加入0.1mg/L的NAA、IBA和IAA，觀察試管苗的生長(zhǎng)和增殖情況。培養(yǎng)基含蔗糖30 g/L、瓊脂7g/L。每種培養(yǎng)基用于統(tǒng)計(jì)的樣品為隨機(jī)抽取15瓶，每瓶中只接1個(gè)外植體，增殖系數(shù)定義為每個(gè)外植體所產(chǎn)生新芽的個(gè)數(shù)。
　　1.2.3生根培養(yǎng)。在1/2MS的培養(yǎng)基中，加入不同濃度的IBA、NAA和IAA，觀察試管苗的生根情況。培養(yǎng)基含蔗糖15g/L、瓊脂7g/L。每種培養(yǎng)基用于統(tǒng)計(jì)的樣品為隨機(jī)抽取20瓶，每瓶中只接1個(gè)叢生芽，統(tǒng)計(jì)生根率。
　　1.2.4培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度25~28℃，光照11~12h/d，光強(qiáng)1 000~1 500Lx，培養(yǎng)基pH值5.9。
　　
　　2結(jié)果與討論
　　
　　2.1增殖培養(yǎng)
　　將帶節(jié)莖切段接種到不同濃度的6-BA的MS+NAA 0.1mg/L 培養(yǎng)基上，培養(yǎng)至第九天時(shí)在多數(shù)培養(yǎng)基上外植體節(jié)上有側(cè)芽萌動(dòng)，培養(yǎng)至第十七天時(shí)在一些培養(yǎng)基上莖兩端切口處形成愈傷組織，培養(yǎng)至第三十六天時(shí)大多數(shù)培養(yǎng)基上有芽生成，第四十五天時(shí)統(tǒng)計(jì)產(chǎn)生的新芽數(shù)量，計(jì)算增殖系數(shù)，結(jié)果如圖1所示。由圖1可知，隨著6-BA濃度的增大，試管苗的增殖系數(shù)表現(xiàn)為先上升后下降的趨勢(shì)。當(dāng)6-BA濃度為1.0mg/L時(shí)，試管苗的增殖系數(shù)為6.3，顯著高于其他各濃度處理。
　　
　　
　　在MS+6-BA 1.0mg/L的培養(yǎng)基中，分別加入0.1mg/L的NAA、IBA和IAA，統(tǒng)計(jì)試管苗的增殖系數(shù)，其結(jié)果如圖2所示。圖2表明，相同濃度的NAA、IBA和IAA對(duì)試管苗的增殖系數(shù)的影響不盡相同。其中NAA為0.1mg/L時(shí)試管苗增殖系數(shù)最大，顯著高于IBA和IAA。綜合圖1和圖2可知，美國(guó)金鐘連翹試管苗增殖的最適培養(yǎng)基應(yīng)為MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L。
　　
　　2.2生根培養(yǎng)
　　將培養(yǎng)在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L的增殖苗切成單芽植株，接種到分別添加0.5mg/L、1.0mg/L、1.5mg/L、2.0mg/L、2.5mg/L的IBA、NAA和IAA的1/2MS培養(yǎng)基中，觀察試管苗的生根情況，統(tǒng)計(jì)生根率，結(jié)果如圖3所示。由圖3可知，當(dāng)激素濃度相同時(shí)，添加IAA顯著有利于促進(jìn)試管苗的生根；當(dāng)IAA濃度為1.5mg/L，試管苗的生根系數(shù)最大，達(dá)98.7%。因此，最適合美國(guó)金鐘連翹試管苗生根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為1/2MS+IAA 1.5mg/L。
　　
　　2.3試管苗的移栽
　　試管苗在瓶?jī)?nèi)生根后，在自然光照和溫度20~25℃的條件下煉苗20d左右，當(dāng)苗高7~10cm、有4~5條白色長(zhǎng)根時(shí)，從瓶?jī)?nèi)取出洗凈培養(yǎng)基，然后移栽到蛭石中，每天澆Horland營(yíng)養(yǎng)液，并加塑料袋保濕，10d后成活率達(dá)84.3%。定植于腐殖土中并移入溫室栽培，最終成活率可達(dá)91.2%。
　　
　　3參考文獻(xiàn)
　　[1] 虞敏，虞德源.美國(guó)金鐘連翹[J].中國(guó)花卉園藝，2002（12）：14-15.
　　[2] 唐道城，梁順祥.觀賞植物組織培養(yǎng)研究進(jìn)展[J].青海大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2006（4）：26-29.
　　

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