外植體的處理:從生長健壯的優(yōu)良母株上剪取幼嫩莖段,無菌水沖洗2~4遍,在超凈工作臺(tái)無菌條件下,0.1%升汞溶液消毒6~8分鐘,無菌水沖 洗5~6遍。切去與藥液接觸過的切口,切為2~3mm的幼嫩莖段,接種在經(jīng)高壓滅菌的初代培養(yǎng)基上,并在培養(yǎng)室中培養(yǎng)。培養(yǎng)室溫度23~28℃,光照強(qiáng)度 2000Lx,光照時(shí)間每天14小時(shí),初代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基上糖均加30g/L,生根培養(yǎng)基上加20g/L,而瓊脂均為5.4g/L。
初代培養(yǎng):將外植體接種在MS+BA2.0mg/L+NAA0.05 mg/L初代培養(yǎng)基上培養(yǎng),4~5周后側(cè)芽萌發(fā)產(chǎn)生叢芽,50天后,不定芽長2cm左右時(shí),將其轉(zhuǎn)到繼代培養(yǎng)基上。
繼代培養(yǎng):增殖培養(yǎng)基為MS+BA1.0m/L+NAA0.03 mg/L,10天后不定芽開始分化,30天后不定芽長3~4cm,增殖系數(shù)4~5。將不定芽再次切割,在繼代培養(yǎng)基上培養(yǎng),即可獲得大量的不定芽。