快速繁殖培養(yǎng)基的配制

1、配制母渡：為了減少各種物質(zhì)的稱量次數(shù)，一般接培養(yǎng)基配方中規(guī)定的各種化合物的重量擴大1 0倍、I100倍或1000倍稱量溶解，成為濃縮液，稱為母液。可配制為各種母液，如大量元素母液、微量元素母液。也可配制單種維生素、植物生長素的母液。配制大量元素母液，應(yīng)注意按配方中的排列順序，對每種化合物以其10倍（或1 00、1 000倍）用量單獨稱出，分別溶解，再按先后順序混合在一起，避免發(fā)生反應(yīng)沉淀。最后加蒸餾水定容到1升。配制微量元素母液為達到稱量精確·以每種化合物的100倍或1000倍量分別稱取溶解，再混臺在一起。注意鐵鹽要單獨配制；維生素，植物生長素、細(xì)胞分裂素及氨基酸等都要單個分別稱量溶解，定容后備用。各種母液為避免變質(zhì)，均應(yīng)保存于冰箱中。對較難溶于水的物質(zhì)，如植物生長素類，可用少量0.1N氫氧化鈉溶解，或用95%酒精溶解，再加蒸餾水稀釋定容。細(xì)胞分裂書宜先用少量0.5N或1N鹽酸溶解，加蒸餾水定容。葉酸宜先用少量的稀氨水溶解后加水定容。

2、配制培養(yǎng)基：根據(jù)培養(yǎng)基配方中各種物質(zhì)的具體需要量，用量筒或移棱管從各種母液中逐項按昔吸取。培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的計量單位，我國多用毫克／升。國內(nèi)外有些文獻也有用mol/L為單位。即每升溶液中所含該成分的質(zhì)量。就是將各種成分的摩爾質(zhì)量(g/Mol/l乘以每升溶液中該成分的物質(zhì)的量濃度(mol／L)。如該成分的濃度的單位為mmolL或Umo/L，則每升中所含該成分的質(zhì)量分別為毫克或徽克。（你知道文竹的養(yǎng)殖方法嗎？）

母液的吸取量按下式計量：

母液吸取量（毫升）一每升培養(yǎng)基要求含量／每毫升母液含量

先按量稱瓊脂，加水后加熱，不斷攪拌使溶解，然后加入吸取的各種物質(zhì)的母液及蔗糖，使茸均勻混合·最后用蒸餾水定容。隨即用pH計或pH試紙測定pH值，用0.IN NaOH或IN HO作緩沖劑將培養(yǎng)基的pH調(diào)至5.6-5.8。不同植物的外植體對pH值的要求不同。加I%PB74作緩沖劑，對預(yù)防培養(yǎng)基pH的波動有良好效果。通常培養(yǎng)基的pH值，在滅菌前后，接種外植體后，均會產(chǎn)生一定變化。用分裝器或漏斗將配好的培養(yǎng)基分裝入供培養(yǎng)用的事先已洗凈烤干的玻璃容器（三角瓶或試管）內(nèi)。裝量為容器的1/4-1/5，塞上棉花塞，或用鋁鉑紙或移量紙包扎瓶口，用玻璃鉛筆標(biāo)上記號。

3、培養(yǎng)基的滅菌：固體培養(yǎng)基常用高壓滅菌法。將包扎好的培養(yǎng)基，放入高壓消毒鍋中，在鍋內(nèi)溫度高達120C，壓力穩(wěn)定在0 8--1.1公斤／厘米：，滅菌15-25分鐘．滅菌時間過長，培養(yǎng)基中某些成分易失效。經(jīng)過滅菌的培養(yǎng)基放在4-5C的無菌接種室內(nèi)待用，存放時間不宜太長，一般要在兩周內(nèi)用完。

（三）培養(yǎng)基配方

1 934年美國科學(xué)家懷特（White）首先研究出組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基。以后斯可格(Skoog)、

米勒(Miller)，斯蒂瓦特(Sieward)等都提出不同的培養(yǎng)基配方。不同培養(yǎng)基有其不同的特

點，應(yīng)通過分析和進一步試驗研究，為不同檀物的不同器官，不同培養(yǎng)階段找出最佳配方。

目前在木本植物離體培養(yǎng)中，應(yīng)用較廣的培養(yǎng)基主要有：

I、MS培養(yǎng)基：在術(shù)本植物組培中應(yīng)用最為廣泛。其特點是無機鹽（硝酸鹽、鉀鹽和銨鹽）含量較高；微量元素種類較多，濃度也較高。適合許多樹種對營養(yǎng)的需要，故分化快，生長好。近幾年我們選擇Ms培養(yǎng)基用于10余種針闊葉樹的離體培養(yǎng)均獲得成功。

2、BL培養(yǎng)基(1965)：其成分基本同MS培養(yǎng)基。唯去掉甘氯酸，鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素，增加天冬酰胺。

3、ER培養(yǎng)基(1965)：與MS基本相似。但磷酸鹽含量比Ms高一倍、微量元素卻低得多。

4、H培養(yǎng)基(1967)：大量元素?zé)o機鹽約為MS的一半、磷酸二氫鉀及氯化鈣稍低；徽

量元索含量較MS高但種類少，維生素種類較多，

5、培養(yǎng)基(1968)：硝酸鉀含量較高，不含銨態(tài)氮，鹽酸硫胺紊含量甚高。鹽酸毗

哆素含量也較高。

6、Ns培養(yǎng)基(1975)：硝酸鹽含量高，不含銨態(tài)氮，鹽酸硫胺素含量較高。

7 、SH培養(yǎng)基(1972)；硝酸鉀含量較高，銨與磷酸足以NH4H2PO4提供的。

8、WH培養(yǎng)基(L943)：和改良WH培養(yǎng)基(1981)只含硝態(tài)氮，無機鹽含量低。

9 、WS培養(yǎng)基(1966)：無機鹽含量低，微量元素種類少。適用于某些樹種的生根培養(yǎng)。

10、 HE培養(yǎng)基(1953)：鉀鹽和硝酸鹽是通過不同化合物來提供。無機鹽含量稍低，

11、ls培養(yǎng)基(1965)：與MS培養(yǎng)基類似。大量、微量元素及鐵鹽同MS．有機物質(zhì)中去掉甘氨酸、煙酸和鹽酸毗哆素。

可見，各種培養(yǎng)基的成分，總鹽分濃度，各種鹽類的濃度及各元素間的比例都有很大差異。它們對外植體的形態(tài)發(fā)生及生長速率都有根大影響。一般在芽的形成和增殖階段需要選用較高的總鹽類濃度的培養(yǎng)基。而誘導(dǎo)生根則需較低的總鹽濃度。不同樹種芽形成所需的最佳無機鹽總濃度可相差1-3倍。

上述11種培養(yǎng)基，常在木本植物離體培養(yǎng)中采用，獲得良好的效果。這些培養(yǎng)基中各種無機鹽及有機成分含量詳見表9-1。

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