快速繁殖培養(yǎng)材料的選擇和處理

2012/7/22 9:39:13

為進(jìn)行微體快速繁殖．被分離用作培養(yǎng)體的部分都稱為“外植體”(explant)。外植體因取材的部位不同，又分為若干種。用于微體塊速繁殖的外植體主要是器官(organ)．如莖尖、莖、葉、芽、根、種子等。

（一）培養(yǎng)材料的選擇

外植體選擇適當(dāng)與否，直接關(guān)系到培養(yǎng)的成敗。選擇外檀體應(yīng)注意以F幾方面：

1、取材的種類和部位：不同植物的不同器官產(chǎn)生不定芽和側(cè)芽增殖的能力不同。要選用容易進(jìn)行分化、繁殖、形成新埴株的器官的較幼嫩部位。不同樹木應(yīng)采用不同器官的外植體。針葉樹常用胚、子葉、幼苗片段；闊葉樹多用芽、莖尖、幼苗片段、根和嫩葉等，

2、取材植株的年齡及生理狀況：多年生木本植物的年齡越大，培養(yǎng)越困難。很多事實(shí)證明大多數(shù)樹種，從老齡樹上采集的外植體，器官發(fā)生的能力都很低�？偟内厔菔�，芽、梢及根形成的能力隨年齡的增加而迅速下降。因此，研究如何使成熟樹木通過再生和復(fù)壯，以獲得生理上較為年輕的材料（或稱復(fù)壯材料），顯示幼態(tài)習(xí)性，就具有特殊的實(shí)踐意義。據(jù)國內(nèi)外資抖報(bào)道，采用某些可行的技術(shù)措施，還是有效的。如采用樹樁上的當(dāng)年生萌芽條·樹干基部萌發(fā)的根蘗條；用較老的頂梢作接穗，反復(fù)數(shù)次（4 5次）連續(xù)嫁接到幼嫩植株的根砧上，再取其萌芽條；在主干根頸以上或干下部進(jìn)行部分環(huán)剝，刺激受抑制的芽萌發(fā)，形成嫩枝；通過重剪，阻止植株進(jìn)入成熟期，使其萌條保持幼嫩狀態(tài)，維持較高的形態(tài)發(fā)生能力；還可在離體培養(yǎng)時(shí)，將外植體先接種在含有細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時(shí)間，再轉(zhuǎn)移到含有活性炭的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一定時(shí)間，如此反復(fù)3-4次，也可使培養(yǎng)材料復(fù)壯；對樹木保持高水平的施肥，或噴灑細(xì)胞分裂素，也可使其當(dāng)年生的萌條細(xì)胞還童，從而提高器官發(fā)生能力。當(dāng)然要盡可能從幼齡樹．1-2年生苗木，根蘗苗采集培養(yǎng)體。樹木生命周期長，衛(wèi)由于立地條件的不同和每年氣候的影響，因而導(dǎo)致很大的生理差異。采集營養(yǎng)生長狀態(tài)的培養(yǎng)材料，以春季芽膨大而芽鱗片尚未裂開時(shí)為宜。針葉樹還可采用夏末秋初的芽，因此時(shí)芽內(nèi)已形成針葉原基。（你知道文竹的養(yǎng)殖方法嗎？）

3．外植體的大�。和庵搀w大，具有較大的再生能力，培養(yǎng)成功率較高，但帶病原體也

多易污染；外植體小，帶病原體少，但較難培養(yǎng)。用作一般繁殖的外植體較大，可采用l毫米長的莖尖, 2-3毫米長的莖段（帶一個(gè)芽，或有一個(gè)節(jié)）．2-5毫米見方的葉片等。如為得到無病毒植株，則必須使用分生組織（生長錐帶1- 2個(gè)葉原基）。

（二）培養(yǎng)材料的處理

只有對培養(yǎng)材料進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚�，才能得到無苗的外植體。

1、培養(yǎng)材料的預(yù)栽培：直接采用野外的材料，由于其生理狀況變化大，且難于消毒，往往給培養(yǎng)帶來嚴(yán)重后果。因此，最好將取于田間的接穗、小苗再培養(yǎng)在能保持最適光、溫的溫室或培養(yǎng)室中·以減少生理因素的變化，提高植物形態(tài)發(fā)生的能力，并定期噴灑殺菌劑，再利用其新生的、健康的材料作外檀體。

2、取材植株的預(yù)處理：對必須采用野外生長的材料，可用抗菌素溶液和殺菌劑預(yù)先噴灑植株，或用塑料布包裹枝條。

3、培養(yǎng)材科的貯藏：很多樹木的營養(yǎng)枝，在一年內(nèi)不同時(shí)期的生理狀況變化較大，故每年只有在特定的短期內(nèi)采集材料，才適于培養(yǎng)。因此，為在整年內(nèi)能保證材料的供應(yīng)使用，將采得的培養(yǎng)材科進(jìn)行貯藏是完全必要的。簡便的方法是，將枝條放在紙帶里，外面再套塑料袋。這樣紙袋既可吸收枝條表面過剩的水分，從而減少真菌的感染，塑料袋叉可限制枝條內(nèi)水分的喪失。然后將塑料袋冷藏(溫度2-4℃)。

4、外植體的預(yù)處理：接種前，先切除、刺去外植體的外層，如種皮、外屢的芽、鱗片及老葉。

5、外植體的表面消毒：為徹底殺死外埴體表面附著的各種微生物，避免污染，必須對外植體表面進(jìn)行嚴(yán)格消毒。由于外植體是活的植物組織，消毒時(shí)，既要求把表面附著的微生物殺死，叉不致傷害或殺死組織。要達(dá)到這個(gè)要求是不容易的。解決的途徑是，根據(jù)不同樹種，不同培養(yǎng)材料對試劑的敏感程度，采用與之相適應(yīng)的藥劑、濃度和處理時(shí)間。選用消毒劑的原則，既要消毒效果好，又要消毒后容易被沖洗掉，或者能自動分解為低毒或無害性物質(zhì)·對組織的分化與生長沒有不良影響。最常用的表面消毒劑是次氯酸鈣和次氯酸鈉，使用時(shí)分解成具有殺菌效能的氯氣，隨后就散失到空氣中。對組織的毒害鈣鹽比鈉鹽小。但次氯酸鈣與空氣中的二氧化碳起作用，故不穩(wěn)定。次氯酸鹽的有效性與其pH值有關(guān)。pH為6左右，有效性大，超過8則活性極小。使用消毒劑氯化汞時(shí)，有時(shí)為除去材料表面吸附的汞離子，要用氯化鉀來沖洗。表面消毒通常是將酒精與其它消毒劑結(jié)合使用。不同種類的外植體，表面消毒的順序及方法不同。依材料的種類及老嫩而異。對暴露于空氣中的莖，葉及埋于土中的根，要徹底消毒較為困難。目前，常用的消毒方法是：先用自來水沖洗，用小軟刷去掉塵土，再用吸水紙吸干；然后用70%酒精漂洗數(shù)秒鐘。困70%比其它濃度的酒精的殺菌力要強(qiáng)。漂洗時(shí)間要嚴(yán)格掌握，時(shí)間稍長就會把材料組織殺死；再用表面消毒劑浸泡數(shù)分鐘，或更長一點(diǎn)時(shí)間。常用的消毒劑有0.1-0.5%氯化汞2%（重量／體積）溴水．2-10%次氯酸鈉；最后用無菌水清洗數(shù)次，用無菌紙吸干水后接種。對種子及果實(shí)的消毒比較容易，可用純酒精漂洗�；蛴�2%的次氯酸鈉溶液浸10分鐘，再用無菌水沖洗后，剖取里面的種子或組織接種。

6、外植體的切取和接種：消毒后井用無菌紙吸干的外植體，在無菌條件下，用解剖刀

切取所需大小的莖、葉切段。如要切取分離莖尖的生長點(diǎn)組織，要在解剖鏡下，用解利針、

解剖刀、鑷子小心除掉幼葉或葉原基，使生長點(diǎn)組織露出。分離時(shí)注意不使莖尖受傷。切

取外植體時(shí)，切面經(jīng)常會很快變成棕褐色，這是受傷細(xì)胞中酚對有毒苯醌氧化作用的結(jié)果。

為使細(xì)胞的壓破降到最小，解剖刀要盡量銳利。為此·解剖刀的消毒最好采用先在酒精里

沾一下，再點(diǎn)火燒盡。這種用酒精及其燃燒產(chǎn)生溫?zé)峤Y(jié)合的方法，既能使解剖刀滅菌，又

不會因過熱使刀刃變鈍。為防止組織變色，可采用某些行之有效的辦法，如切取外植體時(shí)．

把組織漫于水中；用各種抗氧化劑、除莠劑和聚乙烯吡咯烷酮處理。

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