紅豆杉組織培養(yǎng)繁育

組織培養(yǎng)繁育紅豆杉
　　組織培養(yǎng)是利用植物細(xì)胞的全能性、和可克隆性。利用紅豆杉植株的嫩莖、針葉、樹皮、形成層、假種皮、胚等做為植體進(jìn)行培養(yǎng)研究。
　�。�1）.選用紅豆杉優(yōu)良品種，如東北紅豆杉的優(yōu)質(zhì)器官（紫杉醇含量較高）做為外植體，接種培養(yǎng)基中，經(jīng)過愈傷組織形成、生根、幼苗芽叢形成等驟，在實(shí)驗(yàn)室可獲得大量的組培苗。在經(jīng)過基質(zhì)移栽、練苗、檢查防疫后成為生產(chǎn)用苗。
　�。�2）.紅豆杉的愈傷組織形成的遲與早的比率，在不同的種類和同一種類不同植株之間存在差異。同時與外植體類型、取樣部位及采集季節(jié)、光照條件、培養(yǎng)基種類等因素有關(guān)。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，東北紅豆杉、南方紅豆杉、云南紅豆杉均能形成愈傷組織。但形成情況因紅豆杉的種類及植株的不同也有差異。
曼地亞紅豆杉的組織培養(yǎng)：
1.愈傷組織發(fā)生：
具有較強(qiáng)分生能力的新生莖段和葉片能夠得到很高的誘導(dǎo)率,與萘乙酸(NAA)相比, 2, 4 - 二氯苯氧乙酸(2, 4 - D)在誘導(dǎo)中作用顯著。
在繼代培養(yǎng)中, 2, 4 - D 比NAA 對愈傷組織生長的促進(jìn)作用顯著, 6 - 芐基腺嘌呤( 6 -BA)對愈傷組織生長的促進(jìn)作用極顯著。在第20 天就開始轉(zhuǎn)移繼代和提高愈傷組織與培養(yǎng)基接觸面的氧氣供給,能夠較好控制褐化現(xiàn)象的發(fā)生。在含有5mg/L 2, 4 - D、0. 5mg/L 6 - BA及1g/L 活性炭(AC)的B5培養(yǎng)基上,愈傷組織細(xì)胞增殖倍數(shù)最大達(dá)到4. 7,褐化也能得到部分控制。
具有較強(qiáng)分生能力的新生莖段和葉片能夠得到很高的誘導(dǎo)率, 與NAA 相比, 2, 4!D 在誘導(dǎo)中作用顯著。含有3mg/L2, 4!D+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L 6!BA 的MS 培養(yǎng)基有利于愈傷組織的誘導(dǎo), AC 對愈傷組織生長作用不明顯, 但AC 的使用使愈傷組織顏色保持為綠色, 能很好的抑制褐化的產(chǎn)生過高的活性碳對激素吸附嚴(yán)重, 影響愈傷組織的誘導(dǎo). 提高NAA 的量可以減少愈傷組織誘導(dǎo)的時間
在繼代培養(yǎng)中, 2, 4!D 比NAA 對愈傷組織生長的促進(jìn)作用顯著, 6!BA 對愈傷組織生長的促進(jìn)作用極顯著。在繼代培養(yǎng)中, 第20 天就開始轉(zhuǎn)移繼代和提高愈傷組織與提高培養(yǎng)基接觸面的氧氣供給能夠較好克服褐化。在含有5 mg/L 2, 4!D +0.5 mg/L 6 BA+1 g/L AC 的B5 培養(yǎng)基上,愈傷組織細(xì)胞增殖倍數(shù)最大達(dá)到4.7, 褐化可得到部分控制。
B5 為基本培養(yǎng)基略優(yōu)于M S。綜合結(jié)果是, 以B5+ KT 110 mg/L + NAA 110 mg/L + 2, 42D 210 mg/L (1)B5 比M S 更適合作為曼地亞紅豆杉繼代培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基; (2) 2, 42D 和NAA組合比單獨(dú)使用更利于曼地亞紅豆杉愈傷組織生長;( 3) KT 為愈傷繼代較好的細(xì)胞分裂素類激素, 在合適的培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件下, 每30d 的增殖系數(shù)達(dá)5.2 倍。在培養(yǎng)基中添加抗竭化試劑, 有利于曼地亞紅豆杉愈傷的繼代培養(yǎng), 其合適的種類和濃度分別為: 活性碳500mg/L , 維生素C1000 mg/L , 水解乳蛋白1000Mg/L。
曼地亞紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中, 生長素與細(xì)胞分裂素的比例應(yīng)在10∶1 左右; 2 , 4 - D與NAA 的比例應(yīng)在2∶1 左右。當(dāng)年生莖段是進(jìn)行曼地亞紅豆杉愈傷組織誘導(dǎo)的較好外植體, 愈傷組織生長也較好。暗培養(yǎng)條件更有利于愈傷組織的誘導(dǎo), 誘導(dǎo)率高, 且誘導(dǎo)出的愈傷組織質(zhì)量好。35 ℃溫水浸泡30 min 的處理對抑制褐化有理想的效果, 外植體褐化現(xiàn)象得到了極大抑制。
繼代培養(yǎng)基為B5 + 2 mg/L - 2 ,4D + 0.5mg/L 6－BA + 1 g/L AC.
2.有效的芽分化培養(yǎng)基及激素配比：
3.組培苗生根培養(yǎng)基及激素配比
WPM + 6－BA 0.05 mg·L- 1 + NAA1.0 mg·L - 1是曼地亞紅豆杉較適宜的生根培養(yǎng)基。
4.腋芽直接誘導(dǎo)叢生芽的方法
MS + 6－BA 0.05 mg·L- 1 + NAA0.5 mg·L - 1是曼地亞紅豆杉腋芽增殖啟動培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基。細(xì)胞分裂素對芽的誘導(dǎo)有利,但對芽的生長抑制作用明顯,濃度稍高,有效芽率便明顯下降。生長素對芽伸長的抑制作用不明顯。不添加生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的MS(有機(jī)物加倍) 培養(yǎng)基是曼地亞紅豆杉側(cè)芽繼代培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)。
5.組培苗煉苗移栽方法

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