秋海棠快速繁殖組織培養(yǎng)技術(shù)

2012/6/24 11:30:59

竹節(jié)秋海棠（B.President－carnot），葉片、葉柄、莖段，以MS為基本培養(yǎng)基。誘導愈傷組織培養(yǎng)基：（1）MS＋BA3——5mg／L（單位下同）＋NAA0.1——0．5。叢生芽增殖培養(yǎng)基。（2）MS＋BA1．0＋NAA0.1。（3）MS十BA0.5十NAA0.1。（4）壯苗培養(yǎng)基：1／2MS（液體）。（5）誘導生根培養(yǎng)基：1／2MS＋NAA0.2。上述培養(yǎng)基均加3．0%蔗糖、0.8%瓊脂，pH值5．8。培養(yǎng)溫度（24±2）℃，光照不宜過強，有80Olx左右即可，光照10h／d。
（一）無菌材料獲得將竹節(jié)秋海棠已平展之幼嫩葉片、葉柄、莖段先用適量洗衣粉對水洗滌，然后用自來水反復沖洗，于無菌條件下用75％酒精藥棉擦拭干凈，放于飽和漂白粉溶液10分鐘，后置于0．1%升汞溶液中消毒2分鐘，用無菌水沖洗5——6次，消毒濾紙吸收干表面水分，葉片切成0．5cm見方小塊，葉柄、莖段則切成約長1cm左右長條，均接種于培養(yǎng)基（1）上。
（二）叢芽的誘導與增殖接種、培養(yǎng)1周后，葉、葉柄、莖段周圍開始膨大、增厚，質(zhì)地變硬，逐漸形式黃綠色愈傷組織，3周后漸漸分化出小芽點，芽點繼續(xù)生長，約5周左右形成明顯的叢生芽。將叢生芽切成小塊，接種于（2）和（3）培養(yǎng)基上進行增殖，小芽叢上不斷分化出很多幼芽。葉、葉柄、莖段在兩個培養(yǎng)基上增殖速率基本相同，約4周左右繼代1次，增殖系數(shù)可達6——9。
（三）壯苗在進行大量增殖階段后，我們停止固體培養(yǎng)而改為液培，將分化芽轉(zhuǎn)接到1／2MS，3周后，可發(fā)現(xiàn)生長健壯、個體粗壯的無根苗。這為以后生根、移苗出瓶，提高適應外界環(huán)境，增強抗病能力，提供了良好條件，移栽更易成活。
（四）根的誘導將高約3cm、生長健碩的無根壯苗，接種到培養(yǎng)基（5）上。2周后，苗基部長出輻射狀白色小根，每株生根5—7條，3周后，根伸長至1．0—1．5cm，生根率達100％。
（五）試管苗的移栽將培養(yǎng)有試管苗的三角瓶蓋打開，在實驗室通風處煉苗3d，取出小苗，洗去根部殘留培養(yǎng)基，種植前根部在0．2%Na2SO4溶液中滯留片刻。移栽到用高壓滅菌消毒過的蛭石＋細沙＋園土（1：1：1）的混合基質(zhì)中，地上部噴施0．1％多菌靈溶液，用薄膜覆蓋，每天噴水2次，1周后揭膜，成活率在95％以上。

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