日本小葉常春藤組織培養(yǎng)無性系快繁方法

2012/6/20 9:03:08

日本小葉常春藤為常春藤屬中耐寒性較強的品種，植株生長健壯，莖葉濃綠，節(jié)間短粗，組織充實，露地越冬性能良好，在筆者所在的揚州地區(qū)已經受了－10℃至－15℃的低溫考驗。霜后莖葉略披紅暈，為不可多得的冬綠型垂直綠化材料，具有很好的推廣應用前景。采用莖節(jié)、葉片為外植體，進行組織培養(yǎng)無性系快繁，可有效解決生產應用過程中種源稀少、養(yǎng)殖速率低的矛盾。
材料與方法
采用多年生日本小葉常春藤一年生莖枝的莖節(jié)和葉片為外植體。莖節(jié)外植體初代培養(yǎng)，材料截成厚0．5厘米的小段，葉片外植體切為0.4×0.5厘米的方塊。培養(yǎng)溫度25℃，光照強度2000lx，光照時間每天12小時。
技術及應用
莖節(jié)外植體帶菌度較高，但組織發(fā)育充實，故以中等強度滅菌劑處理為好，即70％酒精0.5分鐘＋0.1％升汞10分鐘，污染率為29.2％。若將0.1％升汞處理時間增加至15分鐘，雖污染率下降至12.5％，但殺傷率將上升，總體存活率反而會下降，故不宜采用。莖尖外植體因其組織幼嫩，試驗中雖使用最低強度5％的次氯酸鈉處理15分鐘，褐變死亡率仍高達72.9％；再降低滅菌強度，雖死亡率可以下降，但污染率又上升，在實際操作中較難掌握，故外植體的選用以莖節(jié)為宜。
初代培養(yǎng)效應與取材時期密切相關。4月初正值露地栽培植株萌芽期，接種后外植體萌發(fā)率最高，達82.4％；5月上旬取用的為當年萌生新梢，材料帶菌度低，故接種后污染率最低，為20.1％；7月底進入高溫多濕的梅雨季節(jié)，外植體帶菌度急劇上升，滅菌困難，材料污染率上升，高達89.4％。故日本小葉常春藤的莖節(jié)組織培養(yǎng)，外植體取用時間以4月初到5月上旬為宜。
組織培養(yǎng)中，生長素和細胞激動素的添加，均以低濃度為宜。初代培養(yǎng)基以6－BA1.0毫克／升－1＋2.4－D0.1毫克／升－1為好，誘芽率可達90.5％，顯著高于其他處理。誘芽生長量達1.2厘米，呈極顯著變異水平。繼代增殖培養(yǎng)，在6－BA1毫克／升－1水平，生長素配比量仍以低水平為宜，生長素類別以NAA優(yōu)于2.4－D，試驗范圍內以MS＋6－BA1.0毫克／升－1＋NAA0.01毫克／升－1的增殖系數(shù)為高。
葉片愈傷組織誘導培養(yǎng)，接種3天葉片卷曲增厚。這不僅和6－BA／NAA相對比值有關（1∶3＞1∶2＞1∶1），且和其絕對用量水平緊密相關，綜合試驗結果以MS＋6－BA1.0毫克／升－1＋NAA3.0毫克／升－1時最高，達82.4％。
莖節(jié)培養(yǎng)過程中，經多次繼代養(yǎng)殖，發(fā)現(xiàn)有皺葉性狀變異的個體出現(xiàn)。同樣的性狀變異，在其他常春藤物種中有選育成新品種的應用范例，若能將變異性狀加以分離、固定，并擴大養(yǎng)殖，在提高其觀賞特性上具良好的應用前景，不失為一條途徑。若能將組織培養(yǎng)技術和輻照誘變等育種手段相結合，則對常春藤育種研究有很大幫助。

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