試管植物克隆技術(shù)

2012/5/26 9:12:51

克隆是指英文“clone"的音譯：實際上它就是無性繁殖的意思，指以幼苗或嫩枝插條，以無性繁殖或營養(yǎng)繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接 它是指利用生物的一個離體組織材料甚至是細(xì)胞也能培養(yǎng)出來新生的生物體，目前，隨著克隆羊及克隆人的順利實驗成功，克隆技術(shù)已不在是一個神秘的話題，而我們所說的“植物克隆”實際上包括了各種無性繁殖方法，由于“植物的組織培養(yǎng)技術(shù)”較早的發(fā)展，所以，現(xiàn)在我們所說的“植物克隆”一般都是說的“植物組織培養(yǎng)技術(shù)”。
自從19世紀(jì)后半葉世紀(jì)“植物組織培養(yǎng)技術(shù)”即“植物克隆技術(shù)”，提出來到現(xiàn)在，該項技術(shù)還一直是高校院所及大型企業(yè)才有可能完全擁有的技術(shù)，并且其育苗成本也是相當(dāng)?shù)捏@人，以下就植物“組織培養(yǎng)技術(shù)”的一般流程加以描述：從以下的描述大家也可以對比一下“植物非試管克隆新技術(shù)”的操作流程，比較一下它們掌握的難易性。
植物克隆技術(shù)技術(shù)是是利用離體培養(yǎng)技術(shù)在試管內(nèi)大量繁殖植物種苗的方法。它是將植株上的細(xì)胞或小塊組織（比如一塊葉片、一段莖節(jié)、一個芽、一個花蕾中一粒花粉等）在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，在短短幾個月時間內(nèi)便能繁殖出成千上萬個新的植株。植物克隆技術(shù)優(yōu)勢主要是快速、周年生產(chǎn)、變異小、無需種子繁殖等等。
植物克隆工廠是指利用環(huán)境控制和自動化高新技術(shù)進(jìn)行植物全年生產(chǎn)的體系，包括無土栽培、植物克隆等技術(shù)以及植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)的工業(yè)化產(chǎn)體系。1957年世界上第一工廠誕生在丹麥到1998年，日本有用于研究、展示、生產(chǎn)的植物工廠近四十個，其中生產(chǎn)用植物工廠17個。植物工廠建造雖未達(dá)到應(yīng)用普及發(fā)展的時期，但其出現(xiàn)預(yù)示著將來的發(fā)展前景。
植物克隆工廠，其生產(chǎn)采用全封閉的方式，嚴(yán)格實行全面和有效的控制環(huán)境及先進(jìn)的植物工程技術(shù)，使生產(chǎn)到采收的全過程連續(xù)進(jìn)行并高度自動化、流水化作業(yè)，實現(xiàn)全年連續(xù)的生產(chǎn)，完全擺脫了自然條件的限制。
植物克隆技術(shù)基本過程：
一、培養(yǎng)基的制備
1、母液的配制和保存
為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100被的母液，用時按比例稀釋。在配制大量元素?zé)o機(jī)鹽母液時，要防止在混合各種鹽類時產(chǎn)生沉淀，為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合，同時在混合時要注意先后順序，把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯開，以免發(fā)生作用，相互結(jié)合生成沉淀。另外在混合各種無機(jī)鹽時，稀釋度要大，慢慢混合，同時邊混合邊攪拌。
配制好的母液分別貼好標(biāo)簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期及配制1l培養(yǎng)基時應(yīng)取的量。母液儲存于2-4℃的冰箱中。
2、培養(yǎng)基的配制
（1）稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖，加入一定量的蒸餾水，加熱使其溶解。
（2）在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液，包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補加物。
（3）將母液混合物加入融化的瓊脂中，再加入糖類物質(zhì)，定容至所需體積，攪勻。
（4）用1mol/l的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)ph值。
（5）趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。
（6）用棉塞或封口膜蓋住瓶口。
（7）在121-126℃滅菌15-20min。
（8）滅菌后，待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。
二、材料的消毒與接種
1、材料的選擇和確定
不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導(dǎo)條件的反應(yīng)是不一致的，因此，在取材時要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。
2、材料的消毒
一般材料先用自來水沖洗，再用70%的酒精浸泡數(shù)秒，倒去酒精，再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min，后用無菌水沖洗3-5次。
3、接種
將材料切成所需的形狀和大小，接入培養(yǎng)基中。
三、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽
1、初代培養(yǎng)
在初代培養(yǎng)基上，外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導(dǎo)出愈傷組織、直接分化出芽或誘導(dǎo)出胚狀體。
2、繼代培養(yǎng)
將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上，使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。
3、生根
將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)根的形成。
4、試管苗的移栽
打開瓶蓋，逐漸降低濕度，并逐漸增強(qiáng)光照，進(jìn)行馴化，以適應(yīng)環(huán)境，經(jīng)過一段時間的煉苗即可移入盆中。
自19世紀(jì)后半葉世紀(jì)“植物組織培養(yǎng)技術(shù)”即“植物克隆技術(shù)”，提出來到現(xiàn)在，該項技術(shù)還一直是高校院所及大型企業(yè)才有可能完全擁有的技術(shù)，并且其育苗成本也是相當(dāng)?shù)捏@人，以下就植物“組織培養(yǎng)技術(shù)”的一般流程加以描述：從以下的描述大家也可以對比一下“植物非試管快繁技術(shù)”的操作流程，比較一下它們掌握的難易性

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