微型月季莖段快繁技術

2012/5/11 16:21:44

微型月季常用的繁殖方法有播種繁殖、扦插繁殖和組培快繁，但由于一方面種子源較少，一方面有的品種扦插繁殖發(fā)根困難，且受繁殖材料限制，繁殖數(shù)量少，速度慢，多年采穗后還會發(fā)生性狀退化，故前兩者在生產(chǎn)上具有一定局限性。而通過組培方法可以保存其栽培性狀基本不變，并且不受外界氣候和繁殖材料影響，在短時間內(nèi)實現(xiàn)批量生產(chǎn)，滿足市場需求。本研究以微型月季帶芽莖段為外植體，探索其增殖、生根的適宜培養(yǎng)基，建立微型月季莖段快繁體系，旨在為生產(chǎn)上解決種源問題提供又一條高效途徑。

1 材料與方法

1.1 材料微型月季“紅寶石”的當年生健壯無病蟲害嫩枝，帶腋芽。

1.2 方法

1.2.1 外植體處理將嫩枝剪成小段，每段帶一個腋芽，洗衣粉水震蕩清洗后，用流水沖洗。常規(guī)滅菌：0.1%升汞、20 min；2%次氯酸鈉、15min，后用無菌水清洗4次，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)基中（MS + 6-BA 1 mg/L +NAA 0.1 mg/L (以下單位同)）。

1.2.2 增殖培養(yǎng)將成活外植體萌發(fā)后，長至2 cm 左右高的腋芽切下，轉(zhuǎn)至增殖培養(yǎng)基中。根據(jù)瞿素萍等對切花月季的實驗[3]，MS 培養(yǎng)基誘導不定芽效果好，故本研究擬先采用MS 為基本培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)6-BA 與NAA 濃度篩選微型月季“紅寶石”的最佳增殖培養(yǎng)基，不同培養(yǎng)基激素配比見表1。1.2.3 生根培養(yǎng)當增殖苗長至2~3 cm高時，分棵切開轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中。主要對基本培養(yǎng)基類型，激素種類和濃度進行篩選調(diào)節(jié)。不同培養(yǎng)基激素配比見表2。

1.2.4 培養(yǎng)條件MS，1/2MS 為基本培養(yǎng)基，瓊脂5.5 g/L，蔗糖30 g、pH 值為5.8，溫度（22±2）℃，光照強度2 000～3 000 lx，光照時間12 h/d。

2 結果與分析

2.1 初代培養(yǎng)按

1.2.1 中方法進行外植體滅菌后，將材料接種在初代培養(yǎng)基上（污染率和萌發(fā)率統(tǒng)計于表3），3 d 后觀察到污染現(xiàn)象，主要為細菌污染，污染率為35%。初代培養(yǎng)約10 d 后，腋芽開始萌動，萌發(fā)率為58 %，同時腋芽逐漸展開，葉片增多，3 周后即可進行增殖培養(yǎng)。

2.2 不同類型培養(yǎng)基對微型月季增殖的影響將腋芽萌發(fā)，且生長健壯的芽苗分棵切開接種到所列的培養(yǎng)基中，25 d 后統(tǒng)計增殖率并觀察增殖生長情況是，細胞分裂素和生長素配合使用對組培苗增殖率總體上看效果是比較好的。所設計的8 種培養(yǎng)基均能誘導出側(cè)芽，但均呈現(xiàn)一個趨勢，即NAA 濃度相同時，6-BA 濃度越高，反而不利于微型月季側(cè)芽的誘導，較高濃度的6-BA 抑制植株生長，出現(xiàn)腳葉發(fā)黃的現(xiàn)象，當6-BA 濃度為2 時，抑制作用就很明顯了。其中以3 號培養(yǎng)基：6-BA 1 +NAA 0.1 和4 號培養(yǎng)基6-BA 1.5 + NAA0.1 的濃度組合增殖效果較好，分別達100%和102%，且較早誘導出側(cè)芽。

2.3 不同類型培養(yǎng)基對微型月季生根的影響不論在什么激素濃度下，1/2MS 基本培養(yǎng)基根誘導效果都好于MS，說明微型月季生根對基本培養(yǎng)基無機鹽敏感，無機鹽濃度是影響微型月季生根的關鍵因素之一。當將基本培養(yǎng)基各成分降至原來的二分之一時，對微型月季生根有較大改善，這一特點在其他木本植物如紅杉上也有發(fā)現(xiàn)[4-5]。同時在相同基本培養(yǎng)基中，不同激素種類和濃度的使用對微型月季的生根效果存在一定的差異。本試驗中所使用的IBA 和NAA 兩種激素均能誘導微型月季生根，但效果有差異，其根的誘導對IBA較敏感，并且在0.5 mg/L 的濃度時效果最好，生根率可達81 %，18 d 就開始有根突出了，生根植株根的數(shù)量也較均勻，都可達到6~9 條，27 d 左右就可達到移栽標準。

3 討論

(1) 本實驗主要是通過腋芽萌發(fā)來實現(xiàn)微型月季的植株再生，接種到初代培養(yǎng)基中，腋芽萌發(fā)的同時，我們還觀察到大部分外植體在莖段基部長出白色愈傷組織。由此，在以后的研究中我們還可以嘗試通過愈傷組織分化途徑來誘導植株再生，這一途徑在切花月季上已有較多成功的報道[6-7]，但在微型月季上還未見報道。由于愈傷組織分化芽比較容易發(fā)生體細胞無性系變異，這一方法不僅可以誘導植株再生，還能獲得一定數(shù)量的變異植株，我們可以從中發(fā)現(xiàn)并利用其中的優(yōu)良性狀。

(2) 月季組培苗增殖的主要方式為側(cè)芽增殖，即從葉腋處萌發(fā)出側(cè)芽以達到增殖的目的。理想的增殖率與激素種類、濃度和葉腋數(shù)有相互關系。在適宜的激素種類和濃度下，葉腋數(shù)量多的植株發(fā)出來的側(cè)芽數(shù)就多，但植株上部的葉腋處是不能萌發(fā)側(cè)芽的。所以在適宜的激素種類和濃度下，可以根據(jù)材料情況切割，保留一定數(shù)量的葉腋，以達到理想的增殖率。

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