植物莖尖組培實(shí)驗(yàn)過程

2012/5/10 22:58:30

植物莖尖組培實(shí)驗(yàn)過程--1、外植體的選取及預(yù)處理 ⑴外植體選取 選取生長健壯、已發(fā)芽、長勢較好、無病害的生姜根狀莖作為外植體。 ⑵材料預(yù)處理 取帶芽的枝條或鱗莖球莖，洗衣粉適量沖洗，然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位（約1cm×1cm大小），頂芽和腋芽、大芽和小芽分開。繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時(shí)需不停晃動(dòng)。再用自來水沖洗干凈，置空培養(yǎng)瓶備用。 2、超凈工作臺(tái)無菌操作準(zhǔn)備 檢查超凈工作臺(tái)，是否已開機(jī)滅菌，酒精燈、酒精瓶、升汞是否齊備、無菌水、培養(yǎng)瓶放置與位置、接種器械是否齊備與放置。 3、外植體消毒 ⑴蒸餾水沖洗 外植體置于已殺菌開機(jī)的超凈工作臺(tái)上，新潔爾滅洗液消毒雙手，無菌蒸餾水清洗外植體2-3次，需隨時(shí)晃動(dòng)。 ⑵酒精消毒 75%酒精倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體5-60s，時(shí)間長短視植物材料情況而定，一般幼嫩材料和室內(nèi)帶菌培養(yǎng)材料消毒時(shí)間短，老材料或室外材料消毒時(shí)間長。動(dòng)作一定迅速，需晃動(dòng)，然后將酒精倒去。整個(gè)時(shí)間計(jì)算以酒精傾倒開始至酒精倒出瓶外為止， ⑶升汞消毒 1%生汞倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體5-10min，時(shí)間長短視情況而定。需晃動(dòng)，在最后3min靜置，升汞注滿容器，將已灼燒的鑷子放入容器升汞內(nèi)浸泡。 10%次氯酸鈉溶液倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體10-12min，時(shí)間長短視情況而定。 ⑷蒸餾水清洗 用鑷子將外植體取出，放入另一無菌蒸餾水瓶中清洗，反復(fù)清洗4次。 4、材料的整理 用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對(duì)外植體進(jìn)行處理，剝離外植體材料芽外部小葉片，露出尖端生長點(diǎn)和2-3片葉原基部分，將此部分剪下做培養(yǎng)材料。再用無菌蒸餾水清洗3-4次。 5、接入培養(yǎng)基 培養(yǎng)基瓶放入工作臺(tái)內(nèi)，將剝離的材料分別用消毒過的鑷子放入培養(yǎng)瓶內(nèi)，蓋上瓶蓋，置培養(yǎng)籃內(nèi)，寫上培養(yǎng)時(shí)間、操作人及培養(yǎng)品名，入培養(yǎng)室培養(yǎng)。

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