植物組織培養(yǎng)過程

2012/5/10 14:29:17

　　一、培養(yǎng)材料的采集
　　
　　 組織培養(yǎng)所用的材料非常廣泛，可采取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉，有時也利用花粉粒和花藥，其中根尖不易滅菌，一般很少采用。
　　
　　 對于木本花卉來說，闊葉樹可在一、二年生的枝條上采集，針葉樹種多采種子內(nèi)的子葉或胚軸，草本植物多采集莖尖。
　　
　　 在快速繁殖中，最常用的培養(yǎng)材料是莖尖，通常切塊在0.5厘米左右，如果為培養(yǎng)無病毒苗而采用的培養(yǎng)材料通常僅取莖尖的分生組織部分，其長度在0.1毫米以下。
　　
　　二、培養(yǎng)材料的消毒
　　
　�。ㄒ唬┫葘⒉牧嫌昧魉疀_洗干凈，最后一遍用蒸餾水沖洗，再用無菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小塊。
　　
　�。ǘ�）在無菌壞境中將材料放入70％灑精中浸泡30－60秒。
　　
　�。ㄈ�）再將材料移入漂白粉的飽和液或0.01％升汞水中消毒10分鐘。
　　
　�。ㄋ模┤〕龊笥脽o菌水沖洗三、四次。
　　
　　三、制備外植體
　　 將已消毒的材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌的環(huán)境下，剝?nèi)パ康镊[片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，這就是外植體。在操作中嚴禁用手觸動材料。
　　
　　四、接種和培養(yǎng)
　　
　　（一）接種
　　
　　 在無菌壞境下，將切好的外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種4－10個。
　　
　　（二）封口
　　
　　 接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無菌膠帶封口。
　　
　�。ㄈ�）溫度
　　
　　 培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25℃左右，但要因花卉種類及材料部位的不同而區(qū)別對待。
　　
　�。ㄋ模┰鲋�
　　
　　 外植體的增殖是組培的關(guān)鍵階段，在新梢等形成后為了擴大繁殖系數(shù)，需要繼代培養(yǎng)。把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1個月左右后，可視情況進行再增殖。
　　
　�。ㄎ澹└�的誘導(dǎo)
　　
　　 繼代培養(yǎng)形成的不定芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。1個月后即可獲得鍵壯根系。
　　
　　五、組培苗的練苗移栽
　　
　　試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定的環(huán)境進入自然環(huán)境，必須進行煉苗。一般移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來水把根系上的營養(yǎng)基沖洗干凈，再栽入已準備好的基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最好消毒。移栽前要適當遮蔭，加強水分管理，保持較高的空氣濕度（相對濕度98％左右），但基質(zhì)不宜過濕，以防爛苗。

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