組織培養(yǎng)技術(shù)在百合生產(chǎn)中的應用

2012/5/9 14:22:57

百合的繁殖一般采用小鱗莖、鱗片、珠芽等器官進行無性繁殖。其缺點是繁殖系數(shù)低，長期無性繁殖還會導致病毒積累引起品種退化。 在百合研究生產(chǎn)中，已利用組織培養(yǎng)技術(shù)進行快速繁殖，以解決引種過程中，由于無性繁殖系數(shù)低造成的難于快速擴大推廣的困難。我國上海百合試管苗早已出口荷蘭。在新品種培育、莖尖脫毒苗培養(yǎng)上，組織培養(yǎng)也是有效方法。 1．外植體 百合的鱗莖盤，鱗片、珠芽、葉片、莖段、花器官各部和根等等，用作外植體，都有能分化成苗。各種外植體培養(yǎng)時，都可切割成5-8毫米左右的小塊或切段。 2．材料消毒 洗凈的材料，先用70%的酒清浸搖30-60秒，然后用飽和漂白粉上清液或0.1%升汞溶液消毒10-20分鐘（視材料健幼而異），無菌水漂洗4-8次，即可按無菌操作切塊（段）接種�；ㄆ鞴俚扰囵B(yǎng)時，常取未開放的花蕾，消毒后切開，取其內(nèi)材料接種。 3．培養(yǎng)條件 溫度20-25℃，光照800-1200lux，每天9-14小時照明，培養(yǎng)基PH值為5.6-5.8。 4．培養(yǎng)基和培養(yǎng)結(jié)果 一般用瓊脂固體培養(yǎng)基，常用配方是MS+蔗糖或白糖30克/升，按需加入各種植物激素。 （1）無菌種子播種 用1/2MS，不加任何激素。種子可萌發(fā)為無菌實生苗。 （2）鱗片、葉片培養(yǎng) 用MS+BA 0.1~1.0+NAA0.1~1.0毫克/升。對于不同種或品種的百合，激素含量與種類不同，以后鱗片或葉片都可產(chǎn)生小鱗莖狀突起而分化成苗。在高NAA低BA的培養(yǎng)基上，可1次形成完整植株，但幼苗根部有腫脹現(xiàn)象。相反，高BA低NAA時，能形成大量小鱗莖狀突起，從中分化出芽而無根。這樣的苗子可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基上（MS+IAA1+BA0.2，或MS+NAA0.8~1.0毫克/升+BA0.2毫克/升，培養(yǎng)基PH值為5.8�；蛴肗AA、IBA代替IAA），使其壯苗生根。杜永芳等采用ABT生根粉替代NAA和IBA，對百合組培苗有良好的發(fā)根效果，最適濃度為0.3毫克/升。將生根的植株直接移入營養(yǎng)缽中易于成活。 （3）莖段、花柱和珠芽的培養(yǎng) 用MS+IAA1+BA0.2毫克/升，可以直接分化出芽。在花器官中以花絲為材料，優(yōu)于花柱和子房。麝香百合花器培養(yǎng)的植株，生長約6個月以后，即可開花。 （4）根的培養(yǎng) 以毛百合根為材料，在MS+NAA0.5~1.0毫克/升的培養(yǎng)基上，形成腫脹的粗根，將其切成小段，轉(zhuǎn)到MS+BA2+NAA0.2的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，便能分化出苗。而輪葉百合在上述培養(yǎng)基上不形成腫脹的根段。毛百合試管苗經(jīng)5-6個月后，能形成直徑17毫米左右的鱗莖，移栽后成活情況良好。一些品種如Rainbow hybrid和Pink perfection的試管苗移栽后一年半，即開出大而美麗的花朵。 （5）胚培養(yǎng) 培養(yǎng)時仍以MS培養(yǎng)基較好，蔗糖濃度視種類而異，常在20-40克/升間。PH什以5.0較為適宜，NAA用量只宜在0.01-0.001克/升間，加入適量BA有利幼胚成活。高BA會抑制胚根的產(chǎn)生，并促進胚組織愈傷組織化。通常先用MS+BA1+NAA0.1培養(yǎng)促進愈傷組織生長，然后將長大的愈傷組織轉(zhuǎn)移到1/2MS不加任何激素的培養(yǎng)基上，約2個月后，可形成大量的不定芽，延長培養(yǎng)時間，就會生根，產(chǎn)生出完整的雜交后代。 （6）百合無病毒培養(yǎng) 百合主要受花葉病毒等侵染，引起品種退化，鱗莖變小。培育無病毒苗仍是當前防治病毒的有效方法。因為病毒在植物體上的分布是不均勻的。幼嫩的莖尖分生組織中病毒含量微少。甚至不含病毒植株。 取材：在消毒的百合嫩梢上取0.2-0.3毫米的莖尖分生組織，或先進行鱗片培養(yǎng)（通過砂培或試管培養(yǎng)），待形成小球莖后，在其上剝離分生組織進行培養(yǎng)。 培養(yǎng)：接種好的百合莖尖分生組織，通常置于25-28℃的溫度，光照強度初期1000-1500勒克斯、后期3000勒克斯，16/8小時的光暗周期的條件下培養(yǎng)。采用過的培養(yǎng)苗有： White、Barker、Kassanis、改良Ms以及Nielsen等。

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