植物克隆技術(shù)基本過程

一、培養(yǎng)基的制備

1、母液的配制和保存

為減少工作量一般將各種成分配成比所需濃度高10-100被的母液，用時按比例稀釋。在配制大量元素?zé)o機(jī)鹽母液時，要防止在混合各種鹽類時產(chǎn)生沉淀，為此各種藥品必須在充分溶解后才能混合，同時在混合時要注意先后順序，把鈣離子、錳離子、鋇離子和硫酸根、磷酸根錯開，以免發(fā)生作用，相互結(jié)合生成沉淀。另外在混合各種無機(jī)鹽時，稀釋度要大，慢慢混合，同時邊混合邊攪拌。

配制好的母液分別貼好標(biāo)簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期及配制1L培養(yǎng)基時應(yīng)取的量。母液儲存于2-4℃的冰箱中。

2、培養(yǎng)基的配制

稱取規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖，加入一定量的蒸餾水，加熱使其溶解。

在燒杯中加入規(guī)定量的各種母液，包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他的特殊補(bǔ)加物。

將母液混合物加入融化的瓊脂中，再加入糖類物質(zhì)，定容至所需體積，攪勻。

用1mol/L的氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)pH值。

趁熱將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中。

用棉塞或封口膜蓋住瓶口。

在121-126℃滅菌15-20min。

滅菌后，待壓力歸零后將培養(yǎng)基取出讓其凝固。

二、材料的消毒與接種

1、材料的選擇和確定

不同種類的植物以及同種植物不同的器官對誘導(dǎo)條件的反應(yīng)是不一致的，因此，在取材時要充分考慮季節(jié)的影響、器官的生理狀態(tài)和發(fā)育年齡、取材的部位以及材料的大小。

2、材料的消毒

一般材料先用自來水沖洗，再用70%的酒精浸泡數(shù)秒，倒去酒精，再用0.1%的升汞溶液或2-10%的次氯酸鈉溶液浸泡10-15min，后用無菌水沖洗3-5次。

3、接種

將材料切成所需的形狀和大小，接入培養(yǎng)基中。

三、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根與移栽

1、初代培養(yǎng)

在初代培養(yǎng)基上，外植體經(jīng)不同的途徑可以誘導(dǎo)出愈傷組織、直接分化出芽或誘導(dǎo)出胚狀體。

2、繼代培養(yǎng)

將初代培養(yǎng)產(chǎn)物轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基上，使愈傷組織分化出叢生芽、不定芽繼續(xù)增殖、胚狀體發(fā)育成完整植株。

3、生根

將健壯的試管苗插入生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)根的形成。

4、試管苗的移栽

打開瓶蓋，逐漸降低濕度，并逐漸增強(qiáng)光照，進(jìn)行馴化，以適應(yīng)環(huán)境，經(jīng)過一段時間的煉苗即可移入盆中。

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