組培過(guò)程中無(wú)菌接種過(guò)程

2012/2/5 9:12:28

1、外植體的選取及預(yù)處理

⑴外植體選取：選取生長(zhǎng)健壯、已發(fā)芽、長(zhǎng)勢(shì)較好、無(wú)病害的植物帶芽的枝條作為外植體。

⑵材料預(yù)處理：取帶芽的枝條，用洗衣粉適量沖洗，然后扳取或用清潔剪刀剪取帶芽部位（約1cm×1cm大小），頂芽和腋芽、大芽和小芽分開(kāi)。繼續(xù)用洗衣粉清洗10分鐘，清洗時(shí)需不�；蝿�(dòng)。再用自來(lái)水沖洗干凈，置空培養(yǎng)瓶備用。

2、外植體消毒

⑴蒸餾水沖洗：外植體置于已殺菌開(kāi)機(jī)的超凈工作臺(tái)上，新潔爾滅洗液消毒雙手，用無(wú)菌蒸餾水清洗外植體2-3次，需晃動(dòng)。

⑵酒精消毒：75%酒精倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體30-60s，時(shí)間長(zhǎng)短視植物材料情況而定。動(dòng)作一定迅速，需晃動(dòng)。然后將酒精倒去。

⑶升汞消毒：1%生汞倒入裝外植體的容器內(nèi)，消毒外植體5-10min，時(shí)間長(zhǎng)短視情況而定。需晃動(dòng)，在最后3min靜置，升汞注滿容器，將已灼燒的鑷子放入容器升汞內(nèi)浸泡。

⑷蒸餾水清洗：用鑷子將外植體取出，放入另一無(wú)菌蒸餾水瓶中清洗，反復(fù)清洗4次。

⑸莖尖的剝離：用灼燒冷卻的鑷子和剪刀對(duì)外植體進(jìn)行處理，剝離外植體材料芽外部小葉片，露出尖端生長(zhǎng)點(diǎn)和2-3片葉原基部分，將此部分剪下做培養(yǎng)材料。再用無(wú)菌蒸餾水清洗3-4次。

⑹接入培養(yǎng)基：培養(yǎng)基瓶放入工作臺(tái)內(nèi)，將剝離的材料分別用消毒過(guò)的鑷子放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，蓋上瓶蓋，置培養(yǎng)籃內(nèi)，寫(xiě)上培養(yǎng)時(shí)間、操作人及培養(yǎng)品名，入培養(yǎng)室培養(yǎng)。

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