國蘭莖頂組織培養(yǎng)技術(shù)

中國蘭新芽生長期正值南方高溫高濕的多雨季節(jié)，雜菌繁衍猖獗，土壤、介質(zhì)中帶菌尤為嚴(yán)重。供接種取樣的蘭盆介質(zhì)應(yīng)盡少帶雜菌，不施有機(jī)肥，放置在透光避雨處，當(dāng)新芽初露時(shí)即讓幼芽裸器上面。取6～13cm長的新芽，從植株基部切高，用刮刀除去根、贓物和外包葉2～3片，充分洗凈后將材料再切取2～3cm長，在10％次氯酸的藥液中消毒10分鐘。如帶菌嚴(yán)重，應(yīng)用0．i1%升汞和飽和漂白粉上清波交叉消毒。滅菌后用無菌水沖洗數(shù)次，再放到滅菌濾紙上吸干水許，然后在解剖鏡下無菌操作利取莖尖和腋芽。如果以去病毒為目的，所剝?nèi)〉那o尖應(yīng)在o．2mm以下，否則可剝?nèi)?mm以上莖類，帶2個(gè)葉原基，有利于成活。

　　原球莖的誘導(dǎo)

　　蘭花各個(gè)部分的離體組織部能誘導(dǎo)形成原球莖，再經(jīng)分化培養(yǎng)形成植株。一旦形成原球莖后，就能不斷分割繼隊(duì)培養(yǎng)增殖起來，也就是建立了無性繁殖系。蘭花的原球莖生命力強(qiáng)，遺傳性狀穩(wěn)定，對(duì)快速繁殖及種質(zhì)資源保存極為有利。

　　外植體接種后放置在23一25度的黑暗條件下培養(yǎng)，1～2十月后可分比出1至數(shù)個(gè)乳白色的原球莖，在解剖鏡下觀察類似桑果形狀的園球突起，以后轉(zhuǎn)綠，再經(jīng)培養(yǎng)易呈根狀莖，。影響蘭花原球莖誘導(dǎo)成功的因素有：

　　1、品種的影響：不同品種由于遺傳類型、內(nèi)源激素和多酚類物質(zhì)含量等囚素的差異，誘導(dǎo)啟動(dòng)的難度也不盡相同。

　　2、培養(yǎng)基的影響：各品種對(duì)不同培養(yǎng)基的適應(yīng)程度不一樣。春蘭類品種以white＋ba；＋naa5＋cm8．5％和b11+ba＋naa2為好。“夏蕙”、“秋素”等則以ms＋ba0.5＋naa1十活性炭0.5％的培養(yǎng)基為好。初步觀察，春蘭品種適應(yīng)以無機(jī)鹽濃度和氨態(tài)氮含量低，而生長素含量高的培養(yǎng)基。“夏蕙”、“秋素”等品種則適應(yīng)無機(jī)鹽濃度較高、生長素含量較低的培養(yǎng)基。

　　3、新芽氏度及材料類別的影響：莖尖無論啟動(dòng)率和成功率均高于測芽以9～13公分的新芽誘導(dǎo)，成功率最高。

　　4、誘導(dǎo)啟動(dòng)后褐變死亡的影響：國蘭品種的莖頂接種后成活并膨大呈桑果狀原球莖因?yàn)閱?dòng)，成功率尚好，但啟動(dòng)后容易褐變死亡，是國蘭組培失敗的原因之一。據(jù)四川農(nóng)科院生物技術(shù)研究所的資料，褐變死亡數(shù)幾乎占3／4。由于國蘭芽端具有較多的多酚氧化酶，經(jīng)莖項(xiàng)培養(yǎng)易褐化而死亡，如采用較大的外植體接種，降低培養(yǎng)溫度、暗培養(yǎng)、盡量減少傷口面以及在培養(yǎng)基中附加褐變抑制劑，或配合應(yīng)用活性炭等，有減輕褐變死亡的效果。

　　、蘭科植物多通過原球莖途徑分化形成植株。熱帶蘭原球莖多呈園球狀，國蘭的原球莖則呈叢生狀。原球莖形成階段是蘭花大量繁殖的有利階段，是快速繁殖，提高增殖率的重要環(huán)節(jié)。莖尖，側(cè)芽接種3～6個(gè)月后，根狀莖形成時(shí)即可分割繼代，增殖培養(yǎng)基以w和b11為基本培養(yǎng)基，附加naa1～2的液體培養(yǎng)基為宜。放置在漫轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)床上加光培養(yǎng)，每隔15天更換一次培養(yǎng)基，連續(xù)繼代3～4次后，又轉(zhuǎn)入相同成分，附加有活性炭和檸檬酸的固體培養(yǎng)基，每月繼代一次。液培、固培交替進(jìn)行。增殖培養(yǎng)中，原球莖的分割不可太小；培養(yǎng)群體不宜太少；培養(yǎng)液則不可過多；繼代培養(yǎng)時(shí)間不可太長，否則原球莖生長不良，甚至死亡。原球莖可以不斷地再分割、增殖，這樣就建立了無性系。國蘭原球莖的繼件次數(shù)和時(shí)間還有待探索，但從已繼代3～5年的原球莖來看，仍保持正常的增殖和分比能力。

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