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花葉香蒲的組織培養(yǎng)和植株再生
自然或人工濕地、濕地生態(tài)工程是近年來迅速發(fā)展起來的一種污水處理技術(shù)，其具有能耗低、高效、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)用前景廣泛[1][2]。其關(guān)鍵在于找到合適的超富集植物。香蒲類植物生活在淺水、濕地或沼澤地區(qū)，分布范圍廣，生長(zhǎng)旺盛，在維持水生生態(tài)系統(tǒng)的良性循環(huán)中有著重要的作用，它能富集水體中的鉛、硒、鋅、銅等多種有害重金屬[3][4][5]，對(duì)氮磷也有一定的吸收作用[5]，能有效減輕水體的營(yíng)養(yǎng)化富集現(xiàn)象，對(duì)保持水生生態(tài)系統(tǒng)的平衡，改良水生生態(tài)環(huán)境有著重要的作用。
花葉香蒲是一種集觀賞性與實(shí)用性于一身的香蒲新品種，它可廣泛應(yīng)用于各種人工或自然水體景觀中，既可提高水體景觀的觀賞價(jià)值，又能起到調(diào)節(jié)水體自身生態(tài)環(huán)境的作用。
花葉香蒲的常規(guī)繁殖以分株繁殖方式為主，長(zhǎng)期大量的分株繁殖常常會(huì)導(dǎo)致種性的退化，從而影響植物的生活力和觀賞價(jià)值，但關(guān)于花葉香蒲的其他繁殖方法尚未見報(bào)道。植物的試管離體繁殖能在一定程度上復(fù)壯植物的種性，本文就花葉香蒲的離體繁殖作一個(gè)初步的探討，以期為花葉香蒲的大量應(yīng)用提供優(yōu)質(zhì)種苗保證。
1 材料與方法
取花葉香蒲的莖尖和幼嫩心葉，經(jīng)千分之一升汞常規(guī)消毒后，無菌水沖洗干凈后，將莖尖逐層剝?nèi)ト~片至5mm左右大小，心葉取基部，切成1.0cm×1.0cm大小方塊，分別接種于各種待試培養(yǎng)基上，置于光環(huán)境和暗環(huán)境中培養(yǎng)。
培養(yǎng)環(huán)境溫度為25℃，光培養(yǎng)光照時(shí)間10小時(shí)，光照強(qiáng)度2500LX。
2 結(jié)果與討論
2．1 莖尖培養(yǎng)
莖尖在光照培養(yǎng)條件下，6天后開始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，12天可見心葉開始抽生，呈淡黃色，部分莖尖基部開始腫大，18天開始抽生第2片小葉，苗高達(dá)3.5cm，在MS+6-BA0.5+NAA0.1和MS+6-BA0.5+NAA0.1。MS+6-A0.5+NAA0.1培養(yǎng)基上部分莖尖基部有愈傷發(fā)生，呈黃色，較疏松，25天開始抽生第三片小葉，愈傷長(zhǎng)大，無分化；暗培養(yǎng)條件下，8天后開始出現(xiàn)褐化現(xiàn)象，12天可見心葉萌動(dòng)，15天個(gè)別基部有腫大現(xiàn)象，21天抽生第二片小葉，25天在MS+6-BA0.5+NAA0.1培養(yǎng)基上部分分化苗有根發(fā)生。
從表1可以看到，在附加激素6-BA為0.5~1.5mg/L或KT為0.5~2.0mg/L和NAA為0.1~0.5mg/L范圍內(nèi)，花葉香蒲的莖尖都能成活并正常生長(zhǎng)成苗。當(dāng)6-BA濃度達(dá)2.0mg/L，有玻璃化苗發(fā)生，而使用KT時(shí)，未見玻璃化現(xiàn)象。
2.2 葉片培養(yǎng)
從表2可以看到，花葉香蒲葉片培養(yǎng)的褐化情況較為嚴(yán)重，分化率低；使用KT作為附加細(xì)胞分裂素和在暗培養(yǎng)的條件下，可部分減輕褐化現(xiàn)象的發(fā)生。過高的激素水平雖可促使愈傷的發(fā)生，但不利于愈傷的生長(zhǎng)，甚至?xí)䦟?dǎo)致愈傷的褐化死亡，而在低水平激素條件下，愈傷生長(zhǎng)緩慢。
綜上所述，可見花葉香蒲的離體繁殖材料以莖尖為好，在添加適量外源生長(zhǎng)激素的情況下可一次成苗，在添加6-BA為0.5~1.5mg/L或KT0.5~2.0mg/L和NAA0.1~1.0mg/L的MS培養(yǎng)基上，離體培養(yǎng)均可獲得成功，光照條件能促進(jìn)莖尖的生長(zhǎng)發(fā)育，但會(huì)加重褐化現(xiàn)象的發(fā)生。
表1 不同培養(yǎng)條件下花葉香蒲莖尖培養(yǎng)的分化情況
培養(yǎng)條件
附加激素配比
材料數(shù)
污染數(shù)
褐化（死亡）數(shù)
分化數(shù)
分化率（%）
備注
光培養(yǎng)
6-BA2.0+NAA1.0
15
2
6
4
57.1
有玻璃化苗發(fā)生
6-BA1.5+NAA0.5
15
0
3
6
50.0
6-BA1.0+NAA0.2
15
2
4
8
72.3
6-BA0.5+NAA0.1
15
5
2
4
50.0
KT2.0+NAA1.0
15
2
0
9
55.6
KT1.5+NAA0.5
15
5
2
5
60.0
KT1.0+NAA0.2
15
3
1
6
62.5
KT0.5+NAA0.1
15
2
1
3
55.6
暗培養(yǎng)
6-BA2.0+NAA1.0
15
1
4
8
25.0
6-BA1.5+NAA0.5
15
1
3
6
80.0
6-BA1.0+NAA0.2
15
0
3
7
58.3
6-BA0.5+NAA0.1
15
4
0
6
55.6
有生根現(xiàn)象發(fā)生
表2 不同培養(yǎng)條件下花葉香蒲葉片培養(yǎng)的分化情況
培養(yǎng)條件
附加激素配比
材料數(shù)
污染數(shù)
褐化（死亡）數(shù)
分化數(shù)
分化率（%）
備注
光培養(yǎng)
6-BA1.0+NAA0.5
30
12
15
0
0
6-BA0.5+NAA0.5
30
9
13
1
12.5
6-BA0.1+NAA0.2
30
3
13
4
28.5
6-BA0.1+NAA0.1
30
7
15
3
37.5
分化愈傷生長(zhǎng)緩慢
KT1.0+NAA0.5
30
7
12
2
18.2
KT0.5+NAA0.5
30
3
8
6
31.6
KT0.1+NAA0.2
30
3
11
3
18.8
分化愈傷生長(zhǎng)緩慢
KT0.1+NAA0.1
30
5
5
1
5.0
分化愈傷生長(zhǎng)緩慢
暗培養(yǎng)
6-BA0.1+NAA0.5
30
6
14
3
33.3
培養(yǎng)后期愈傷部分死亡
6-BA0.5+NAA0.5
30
7
14
0
0
6-BA0.1+NAA0.2
30
8
11
0
0
6-BA0.1+NAA0.1
30
5
17
2
25.0
分化愈傷生長(zhǎng)緩慢
此外，本文只對(duì)花葉香蒲離體培養(yǎng)作了一個(gè)初步的探討，關(guān)于愈傷的培養(yǎng)狀況、引起褐化的原因及解決方法等其它方面有待作進(jìn)一步研究。
作者：林 鴻1 劉錦蘭2 張雄勝1 潘宜平1
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