南芥菜花葉病毒防治

2011/7/5 13:24:56

南芥菜花葉病毒(Arabismosaicvirus,ArMV)屬豇豆花葉病毒科Comoviridaex線蟲傳多面體病毒屬Nepovirus,是我國二類檢疫性植物病毒,在世界各地都有分布,寄主范圍也較廣,約有170多屬、200多種,包括了蔬菜、瓜果、花卉、豆類等幾大類經(jīng)濟(jì)作物,近年檢疫部門就曾在進(jìn)口的葡萄種苗、水仙球莖[和郁金香球莖上檢測出該病毒。我國幅員遼闊,氣候條件的復(fù)雜多樣性,使得有些地區(qū)的氣候狀況很可能適宜ArMV的繁殖,為了防止ArMV傳入我國造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,最有效的方法就是建立快速準(zhǔn)確的檢測方法,目前對ArMV的檢測主要是采用酶聯(lián)免疫法。
基本信息
　　學(xué)名Arabismosaicnepovirous
　　異名Raspberryyellowdwarfvirus,Rhabarbermosaicvirus(rhubarbmosaicvirus)
　　英文名Arabismosaicnepovirous
　　分類地位線蟲等多面體病毒組
　　分布：ARMV主要發(fā)生在比利時，保加利亞，前捷克斯洛伐克，丹麥、法國、德國、匈亞利、愛爾蘭、意大利、盧森堡、荷蘭、波蘭、羅馬尼亞、瑞典、瑞士、英國、前蘇聯(lián)、前南斯拉夫、日本、南非、加拿大、澳大利亞和新西蘭
寄主植物
　　約174屬，215種。為害主要作物有黃瓜、萵苣、芹菜、胡蘿卜、蘆葦、香石竹、水仙、郁金香、茉莉、唐菖蒲、卷丹、月季、常春滕、矮牽牛、福綠考、瑞香、大麻、薄荷、啤酒花、甜菜、煙草、草木樨、櫻桃、桃、葡萄、草莓、懸鉤子、大簧、辣根、西洋接骨木、樹番茄、白蠟樹、橄欖、玫瑰、紅醋栗、馬鈴薯、菠菜、白菜、花椰菜、蕪菁、芥菜、菜豆、豇豆、蠶豆、碗豆、大豆等。
　　ARMV自然侵染野生和栽培的單子葉、雙子葉植物，人工機械接種能侵染28科93種雙子葉植物。ARMV還能侵染裸子植物美國扁柏的根，也能侵染草本試驗寄主，但不同分離物致病性有差異。
　　鑒別寄主：莧色藜、昆諾阿藜、黃瓜、煙草、菜豆、矮牽牛
　　繁殖寄主：矮牽牛、光里夫氏煙
　　試驗寄主：莧色藜、黃瓜
　　主要寄主：草霉、啤酒花、芍藥屬、懸鉤子、大黃屬和接骨木
　　其它寄主：于甘菜、芹菜、水仙、歐洲女、辣根、自三葉草、唐昌蒲屬、辣椒、萵苣、以及一些栽培品種和野生品種。
鑒定特性
　　葡萄上表現(xiàn)"軟皮"和莖溝槽癥狀。懸鉤子黃矮。草莓花葉和黃化縐縮。黃瓜上病葉表現(xiàn)黃色斑點，綠色部分呈不正常的黑色，花"軟木化"并且不形成果實。萵苣上表現(xiàn)為矮化，褪綠，壞死和心部退化。啤酒花（蛇麻草）根部表現(xiàn)為不正常的黑色，且葉子變小。樹番茄上早春表現(xiàn)為輕微褪綠環(huán)斑駁，以后隨著季節(jié)的延續(xù)逐漸消失，果實癥狀為黃色褪綠斑駁。歐洲白蠟樹的葉子上表現(xiàn)為褪綠斑駁，葉形呈鋸齒狀或櫟樹葉狀。煙草表現(xiàn)環(huán)斑，葉片缺刻破損，心葉卷曲。
危害情況
　　ArMV為RNA等徑粒子,直徑為30nm,分生在歐洲,寄主范圍廣,侵染許多寄主植物的種子,易汁液傳播.由線蟲Xiphinemadiversicandatum傳播。
　　主要表現(xiàn)為葉片斑駁、點斑、矮化以及畸形（包括耳突），不同寄主上的癥狀表現(xiàn)不同，而且隨株系，栽培品種、季節(jié)以及年份不同而變化。
　　ARMV引起懸鉤子黃矮，草霉花葉黃皺葉，黃瓜矮化斑駁，萵苣褪綠、矮化，芹菜矮化壞死，連翹黃果，大黃花葉癥狀。ARMV在很多植物上引起癥狀，包括甜菜啤酒花，辣根，水仙，玫瑰，歐洲女貞、白三葉草，芍藥屬等。芍藥屬植物感染此病毒很普遍，包括芍藥扇葉病毒。芍藥扇葉病毒與南芥菜花葉病毒血清學(xué)有差異。ARMV與李矮縮病毒或者李屬壞死環(huán)斑病毒混合侵染櫻桃，產(chǎn)生“櫻桃銼葉病”。
形態(tài)特征
　　粒子特性：
　　ARMV粒子等大，有三種沉降組份：外殼蛋白T組份，和兩個核蛋白組份(M和B)。T，M，B沉降系數(shù)：53，93，126。
　　粒子結(jié)構(gòu)：
　　病毒粒子等徑，直徑為30nm，五或六角形，外殼蛋白由42個亞基組成，負(fù)染色后電鏡下觀察到有些粒子是完整的，有些是部分的，有些無插入，可能對應(yīng)于T,M,B組份。
　　粒子組份：
　　ARMV是單鏈RNA雙分體基因組病毒，兩種RNA分別為和，分別占粒子重量的和。蛋白質(zhì)：外殼蛋白分子量為。
　　株系：
　　許多分離物除致病性有微小差異外，其它與典型摸學(xué)沒有區(qū)別。而啤酒花株系只侵染草本試驗寄主中的莧色藜和昆藜，血清學(xué)上與典型株系有差異。
生物學(xué)特性
　　病毒粒體為球狀正二十面體，直徑為25～30nm，外觀有５或６個角，蛋白質(zhì)外殼有42個形態(tài)亞基組成。ArMV為單鏈RNA病毒，核酸大約占粒體重的27%(M)和41%(B)，RNA基本比率為A=24.9%，C=25.6%，G=21.6%，U=27.9%。
　　蔗糖密度梯度離心后，病毒制劑可分為三層，最上層(T)為蛋白外殼，沒有侵染性，而下面兩層（Ｍ和Ｂ）有侵染性，且顯示出典型的核蛋白吸收光譜。A2650/A280比率底部成分為1.71±0.03，頂部成分為1.56±0.06。沉降系數(shù)為53S(T)、93S(M)、126S(B)。
　　矮牽牛的病汁液致死溫度為55～61℃，稀釋終點為10－3～10－5，體外存活期室溫下為1～2周，有些毒株在室溫下汁液的存活時間較長。
　　株系有葡萄株系（典型株系），黃瓜株系，水仙株系，卷丹株系，啤酒花株系和白芷株系。
　　ArMV有較強的免疫原性，注射兔子可獲得滴度較高的抗血清，應(yīng)用細(xì)胞融合技術(shù)已獲得了單克隆抗體。
生物學(xué)
　　穩(wěn)定性：
　　矮牽牛感病汁液，55～61，放10分鐘，室溫下存放1～2星期或稀釋倍后，病毒喪失侵染性。有些株系室溫下存活期稍長。
　　血清學(xué)：的抗血清較易獲得，試管沉定試驗，微沉定試驗，1％凝膠擴散試驗效果都不錯，膠擴散試驗中，病毒產(chǎn)生一條沉淀線。
　　相關(guān)性：
　　通過血清學(xué)測試，ARMV大多株系間存在近緣血清學(xué)關(guān)系。啤酒花線形株系在膠擴散試驗中與模式株系有差異，但差異程度未見報道。Harrison(1958)發(fā)現(xiàn)ARMV不同株系間有交叉保護(hù)現(xiàn)象，但Jha(D1961)認(rèn)為交叉保護(hù)是不完全的。Schmelzer(1963)發(fā)現(xiàn)南芥菜花中病毒間交叉保護(hù)現(xiàn)象比番茄黑環(huán)病毒間的交叉保護(hù)現(xiàn)象強。ArMV與芍藥扇葉病毒（grapevinefanleafvirus,GVFLV）有遠(yuǎn)緣血清關(guān)系。
傳播途徑
　　介體傳播：
　　模式株系由土壤線蟲Xiphinemadiversicaudatum和X.coxi傳播。X.diversicauolatum的幼蟲和線蟲都能傳播ARMV，但線蟲不能自母代傳王子代，且病毒隨線蟲脫皮而排除。線蟲從受侵染植物根部獲毒只需一天（獲毒伺育期一天），接毒伺育期為三天。線蟲在休耕土壤中生長可保毒至少31天，在對ArMV免疫的懸鉤子品種中可持毒8個月以上。
　　種子傳播：
　　至少有12科15種植物能通過種子傳播ArMV，有些寄主中，10%以上甚至100%傳給后代。許多植物種傳獲侵染后，癥狀不明顯，對于無性繁殖的農(nóng)作物如啤酒花、芍藥等，這種傳播途徑不重要。
　　其它的傳播途徑：植物無性繁殖材料是該病毒最主要的傳播途徑。種植期間，ArMV侵染可能是隨機分布的，也可能是呈塊分布，或者兩者都有，隨機分布是由于使用了部分受害植物材料恩賜塊分布是因為傳毒線蟲在土壤中不規(guī)則分布，或由于種用部分受害植物材料使獲毒的線蟲分布不均所至。
　　在田間，很少發(fā)現(xiàn)該病毒在植物間的接觸傳播，盡管在啤酒花上發(fā)現(xiàn)花粉傳染現(xiàn)象，但沒有證據(jù)說明帶毒花粉能夠侵染健康植株。
　　對于非栽培植物，首先是種子傳毒，其次是通過線蟲進(jìn)行短距離的傳播。
檢疫與防治
　　檢疫方法：
　　1、鑒別寄主反應(yīng)
　　昆諾阿藜和莧色藜上首先出現(xiàn)局部褪綠，然后系統(tǒng)斑駁；黃瓜表現(xiàn)局部褪綠斑，然后系統(tǒng)性黃斑或沿脈變色，植物停止生長；煙草、自肋煙表現(xiàn)褪綠或壞死斑，有些株系產(chǎn)生系統(tǒng)性黃環(huán)、黃斑、線形病毒侵染后長出的葉片無癥。
　　菜豆上表現(xiàn)微弱褪綠壞死斑，后系統(tǒng)性壞死、畸變。
　　矮牽牛上表現(xiàn)局部褪綠斑或壞死環(huán)，接著系統(tǒng)明脈，褪綠環(huán)、線蟲換行。但是，并非所有毒株（如啤酒花株系A(chǔ)rMV-H）都產(chǎn)生這些明顯癥狀，或所有傳染都能產(chǎn)生癥狀，基于這種原因，又由于ArMV通常是和草莓潛環(huán)斑病毒（SLRV）混合侵染，并具有相同的線蟲介體且產(chǎn)生長相似的癥狀，因此利用血清學(xué)鑒定更為準(zhǔn)確。
　　2、血清學(xué)檢測
　　從多克隆抗血清中獲得IgG進(jìn)行EUSA試驗已廣泛用于病毒檢測上，單克隆抗體也已制備出來。有一種單克隆抗體能夠?qū)Ｒ粰z測來自比利時引起啤酒花“刺頭病”的ArMV-H，另一種單克隆抗體用于檢測從不同植物上分離到的11種ArMV株系，前者不能檢測德國ARMV-H，或者至少對其中有些分離物不能檢測。
　　3、免疫電鏡檢測
　　ArMV也可利用免疫電鏡時行檢測，甚至是對單個線蟲檢測，這種方法比普通電鏡至少靈敏1000倍以上。
　　4、抗體修飾法
　　抗體修飾法也是一種常用檢測手段，利用這種方法可以將ArMV與同組其他病毒區(qū)分。
　　5、其它方法
　　侵染啤酒花的英國ArMV-H其分子結(jié)構(gòu)中含有額外的衛(wèi)星核酸，可應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行檢測。另一種檢測方法是利用cDNA克隆斑點雜交試驗,這種方法至少已在兩個實驗中建立.
　　防治方法：
　　防治ArMV的根本辦法是對植物材料進(jìn)行脫毒處理,并嚴(yán)格執(zhí)行檢疫證書管理制度,在線蟲污染地區(qū)種植脫毒菌株,如果沒有其他輔助方法,還不能進(jìn)行徹底防治;輔助方法有土壤熏蒸或土地至少休耕一年,這樣可以較好地控制病害傳播.有些植物如Pholxpaniculata有抗性品種,對于那些重要經(jīng)濟(jì)作物,培育抗病品種是一種積極的對策。
　　檢疫措施：
　　植物材料只能來自有嚴(yán)格檢疫證書管理制度的果園，幼株不帶土壤，以防傳毒線蟲介體。
接種鑒別
　　寄主昆藜(Chenopodiumouinoa)或莧色藜(C.amaranticolor)接種后4～6天出現(xiàn)局部褪綠，系統(tǒng)褪綠斑駁，頂枯。接種番杏后4～6天，接種葉片出現(xiàn)褪綠點，直徑約1～2mm，以后發(fā)展成中空的圓形壞死環(huán)斑，環(huán)紋細(xì)，然后融合成片，其后長出的葉片無癥。
　　血清學(xué)檢測　瓊脂雙擴散法：適宜檢測鑒別寄主的有病癥組織，植檢實驗所抗血清的最適稀釋度用1/40～1/80，病汁用原液；SPA－ELISA：適宜測大量樣品，第一抗體用1/2000稀釋度的抗血清，第二抗體用1/1000，病汁用1/50～1/100；免疫電鏡：用1/1000抗血清誘捕，1/20修飾；檢測ArMV的具體程序為：大量樣品先經(jīng)SPA－ELISA檢測，陽性者再接種鑒別寄主，同時制片做電鏡觀察及瓊脂擴散，其中3項為陽性，確認(rèn)受ArMV侵染。
有關(guān)檢疫規(guī)定
　　南芥菜花葉病毒是我國公布的《中華人民共和國進(jìn)境植物檢疫危險性病、蟲、雜草名錄》中規(guī)定的二類危險性病毒，應(yīng)嚴(yán)格限制傳毒種苗的引進(jìn)數(shù)量。必須引進(jìn)的種苗應(yīng)由出口國出具檢疫證書，進(jìn)口后在檢疫圃內(nèi)試種、檢查和鑒定，對傳毒介體亦應(yīng)嚴(yán)格檢疫。

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