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杜鵑花組織培養(yǎng)技術(shù)
杜鵑花為杜鵑花科杜鵑花屬常綠或落葉小灌木，具有品種多、開花早、花色豐富、花期長等特點。近幾年，由于扦插繁殖技術(shù)的發(fā)展，我國杜鵑花產(chǎn)量有了提高。但是，名貴品種因母本少、繁殖系數(shù)低，仍不能滿足社會需要。而組織培養(yǎng)正是實現(xiàn)杜鵑花工廠化育苗的有效措施。下面將其簡單介紹如下： 一、杜鵑花組培的基本技術(shù)環(huán)節(jié) 杜鵑花組織培養(yǎng)，通常使用的外植體為莖尖、莖節(jié)和花蕾等。因花蕾的分化較為困難，周期長；莖尖的取材受到一定限制，故國內(nèi)多采用莖節(jié)為初代培養(yǎng)的外植體。 殺菌處理時，殺菌能力較強的升汞（氯化汞）易造成外植體材料的褐變死亡，不宜使用。試驗表明，采用飽和的次氯酸鈣液上清液或5％的次氯酸鈉液作為滅菌劑，效果較好，處理時間為15至20分鐘。為加強滅菌效果，還可加入1％的克菌丹或0.1％的吐溫－20（山梨糖醇）配合使用。材料滅菌前的預(yù)處理，通常采用70％酒精浸泡，不超過30秒。此外，用中性洗滌劑進行材料的預(yù)處理，亦可有效降低其滅菌后的污染率。外植材料滅菌流程為：洗衣粉液浸泡20分鐘?流水沖洗至清?70％酒精浸泡30秒?滅菌水沖洗1分鐘?5％次氯酸鈉浸泡15分鐘?滅菌水漂洗3次，每次1分鐘。如此，可將外植體污染率降低到15％以下。 杜鵑花組培所用培養(yǎng)基，為Andeson改良MS培養(yǎng)基：將MS培養(yǎng)基中的硝酸銨和硝酸鉀用量分別減至1／4，取消了碘化鉀成分，鐵鹽的用量增加一倍。因杜鵑花科植物原產(chǎn)于高山酸性土壤，培養(yǎng)基的pH值宜為5.0至5.4。培養(yǎng)室溫度25℃，光照強度3000勒克斯，光照時間12至14小時。 杜鵑花在誘芽培養(yǎng)中使用的激素較一般植物有異，需要活性較強的細胞激動素類物質(zhì)，才能達到滿意的效果。試驗表明，使用ZT的誘芽效應(yīng)最為顯著；添加KT的處理幾乎無叢芽或側(cè)芽發(fā)生，僅是原莖尖的伸長；而選用6－BA處理，則導(dǎo)致培養(yǎng)材料的褐變加劇，效果反不如對照。此外，在其后的增殖培養(yǎng)中，杜鵑花對細胞激動素種類的要求，仍以添加ZT為好。 國外在杜鵑花的組培中多使用2ip作為外源細胞激動素，效果較ZT好。但從經(jīng)濟的角度考慮，仍推薦使用ZT。 二、杜鵑花的初代和繼代增殖培養(yǎng) 杜鵑花初代誘芽培養(yǎng)，NAA濃度不得超過0.1mg／L，ZT用量的增大對誘芽效應(yīng)有明顯促進作用。但提高ZT濃度時，NAA濃度不宜同步增加，ZT／NAA值較大為好。從經(jīng)濟培養(yǎng)的意義出發(fā)，初代培養(yǎng)的激素配比以ZT5＋NAA0.01（mg／L）為宜，培養(yǎng)1個月左右時，誘芽率即可達100％，誘芽系數(shù)6.5。 杜鵑花繼代增殖培養(yǎng)，對細胞激動素要求比初代培養(yǎng)有所下降。雖然增殖效應(yīng)仍隨ZT用量的增加而上升，但已不如初代培養(yǎng)時那么明顯。此外，用于增殖培養(yǎng)的材料性質(zhì)不同，其增殖效應(yīng)也不盡相同，品種間亦存在顯著的差異性。供試品種中，‘小桃紅’以采用叢芽為增殖培養(yǎng)體時的增殖系數(shù)較高（7.6）；而‘花春雨’則反之，以取用芽條時的反應(yīng)為佳（7.5）。 杜鵑花組織培養(yǎng)，從接種到誘芽產(chǎn)生，所需的時間明顯長于月季和菊花等，故其繼代增殖培養(yǎng)的周期也較長。試驗中分別以30天和45天為培養(yǎng)周期進行了統(tǒng)計，在各激素水平配比處理中，其增殖芽總數(shù)，培養(yǎng)45天要比培養(yǎng)30天的高出50％至80％。所以，杜鵑花組培過程中，過于頻繁地切割、轉(zhuǎn)換培養(yǎng)，反達不到快繁的目的。
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