金邊鳳尾蘭的脫毒及組培快繁

2011/1/19 10:49:48

金邊鳳尾蘭為百合科絲蘭屬鳳尾蘭的一個園藝品種,是觀賞價值極高的常綠灌木。常年濃綠,數(shù)株成叢,高低不一。開花時花莖高聳挺立,繁多的白花下垂,姿態(tài)優(yōu)美,可布置在花壇中心、池畔、臺坡和建筑物附近,原產(chǎn)北美東南部,我國各地均有栽培。由于其葉片金邊和巨大的花序十分引人注目,且生長勢強(qiáng)健,栽培要求不高,很受人們歡迎,是優(yōu)良的常綠、彩葉綠化樹種。目前金邊鳳尾蘭生產(chǎn)上存在的主要問題是病毒造成的品種退化,使產(chǎn)量降低、植株矮化,大大降低了商品價值。金邊鳳尾蘭常見的繁殖方式有扦插或分株繁殖等,繁殖系數(shù)低,費時長,且金邊性狀易消失,影響觀賞質(zhì)量。采用組織培養(yǎng)能有效保留金邊性狀,達(dá)到快速繁殖的目的。因此,用脫毒與組培快繁技術(shù)提高產(chǎn)量、改善品質(zhì)就成為金邊鳳尾蘭栽培取得高經(jīng)濟(jì)效益的關(guān)鍵。
1莖尖培養(yǎng)脫毒
侵染金邊鳳尾蘭的病毒主要有金邊鳳尾蘭褪綠斑駁病毒、皺葉病毒等。一般帶毒植株在35~38℃條件下種植2個月,經(jīng)高溫?zé)崽幚?就能使病毒失去活性。為了徹底消除病毒,可將植株栽培在熱處理條件下,處理一段時間后,再采取其莖尖進(jìn)行離體培養(yǎng),這樣脫毒效果更好。
1.1材料選擇及消毒
金邊鳳尾蘭外植體材料要選擇品種優(yōu)良、生長健壯、無病蟲害的植株。截取帶葉莖干,逐層剝?nèi)ト~片,然后切留2cm帶頂莖段,用洗滌液或洗衣粉液充分洗滌,再用清水反復(fù)沖洗,置于超凈臺上放入0.1%的升汞溶液內(nèi)消毒8~10min,取出后用無菌水沖洗3~5次。消毒及沖洗過程中要不斷搖動,使藥劑充分接觸,消毒徹底。
1.2剝?nèi)∏o尖
帶頂莖段消毒后,放在無菌紙上吸干水分,在超凈臺無菌條件下,用鑷子及解剖刀剝?nèi)ツ廴~,露出生長錐。移入25~50倍解剖鏡下,用刀尖切下0.3~0.5mm的生長點,并帶1~2個葉原基,迅速接種到培養(yǎng)基上,防止莖尖脫水。接種時應(yīng)使莖尖向上,不能倒置。莖尖剝離的大小是脫毒效果的關(guān)鍵技術(shù)。莖尖剝離越小,脫除病毒的效果越好,但接種不易成活;莖尖剝離得越大,接種成活率越高,但脫除病毒的效果差。
1.3結(jié)合熱處理脫毒莖尖培養(yǎng)
將帶毒植株進(jìn)行盆栽,放入人工控制箱內(nèi)經(jīng)38~40℃高溫處理6~8周,采切0.5mm大小的莖尖培養(yǎng),脫除褪綠斑駁病毒、皺葉病毒等。結(jié)合經(jīng)高溫?zé)崽幚砗颓o尖培養(yǎng)脫除病毒,操作簡便,容易掌握,脫毒效果好,莖尖培養(yǎng)成活率高。
1.4無毒莖尖的培養(yǎng)
將剝?nèi)〉那o尖在MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.6%,pH值5.8的培養(yǎng)基上培養(yǎng),培養(yǎng)溫度控制在25±1℃,光照強(qiáng)度為1000~2000Lx,每天光照10~12h,室內(nèi)相對濕度控制在60%~70%。光照過強(qiáng)時,葉片容易失水而黃化。培養(yǎng)試管內(nèi)空氣濕度大,有利金邊鳳尾蘭生長。一般培養(yǎng)4d后開始出現(xiàn)愈傷組織,6d后在切口處長出淡黃不透明的愈傷組織塊,經(jīng)1周左右的培養(yǎng),即可觀察到莖尖形成約2~3mm的小芽點,隨后芽點轉(zhuǎn)綠膨大,2周時可見到萌發(fā)出多個綠芽;25d后,綠芽逐漸抽莖長葉;培養(yǎng)1個月左右時,株高可達(dá)2cm。
1.5無病毒苗的鑒定
當(dāng)莖尖培養(yǎng)達(dá)到一定數(shù)量后,取出部分作嚴(yán)格的病毒檢測。用抗血清法、電子顯微鏡檢測法、ELISA法或指示植物法進(jìn)行病毒的鑒定,以確保脫毒后的試管苗不含病毒。
2快速繁殖
2.1繼代增殖
經(jīng)鑒定合格后,可繼代擴(kuò)大增殖。金邊鳳尾蘭的繼代增殖以莖段增殖或叢生芽增殖,這種方式繁殖速度快、增殖倍數(shù)高、種性變異小、成苗率高。繼代培養(yǎng)與莖尖分化采用相同的培養(yǎng)基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.6%,pH值5.8,培養(yǎng)溫度25±1℃,光照強(qiáng)度2000~3000Lx,每天光照14~16h,能分化大量不定芽,形成無根苗。當(dāng)培養(yǎng)基顏色逐漸變暗灰色,不定芽發(fā)生轉(zhuǎn)移后,應(yīng)轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上。25d后,每個芽周圍又可長出2~3個不定芽,60d長成2~3cm的叢狀芽,此時即可切下來再進(jìn)行繼代培養(yǎng)。以后每25d可繼代增殖1次,反復(fù)進(jìn)行繼代增殖,就能在較短時間內(nèi)繁殖出大量嫩芽。
2.2生根培養(yǎng)
金邊鳳尾蘭需經(jīng)生根培養(yǎng)后,才能移栽。當(dāng)增殖培養(yǎng)過程中所產(chǎn)生的不定芽長至2~3cm高以上時,可將其在無菌條件下從基部切割下來,然后轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上以誘導(dǎo)生根。生根培養(yǎng)基成分為1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖3%+瓊脂0.6%+活性炭0.3%。1周后,嫩莖基部形成愈傷組織,培養(yǎng)2~3周生根。
2.3移栽與管理
待組培苗在瓶內(nèi)培養(yǎng)形成大量完整的根系時,即可煉苗移栽。將培養(yǎng)瓶由培養(yǎng)室轉(zhuǎn)移到普通房間中,打開瓶蓋,置室溫和自然光照下煉苗3~5d,使幼苗逐漸適應(yīng)外界環(huán)境條件。移栽時可先往瓶中加少量清水,并搖動培養(yǎng)基,然后用鑷子把苗輕輕取出,洗去根部帶的培養(yǎng)基,以防雜菌滋生,再栽植于經(jīng)過干熱滅菌處理的蛭石內(nèi),栽后澆足水,盤上用塑料薄膜罩嚴(yán),以減少水分蒸發(fā)。5d后逐漸揭膜見光,及時通風(fēng)換氣,定期噴藥,防止有害菌類的污染,提高試管苗的成活率。為了預(yù)防真菌或細(xì)菌引起的病害,也可將苗用高錳酸鉀溶液浸泡1~2min,稍晾干后栽植�；�質(zhì)濕度是根系成活的關(guān)鍵,移栽時應(yīng)注意嚴(yán)格控制基質(zhì)的水分,既要保持基質(zhì)濕潤,又要防止水分過多造成爛苗。移栽初期幼苗有轉(zhuǎn)黃現(xiàn)象,這是因為初期不適應(yīng)所致,并不影響成活率。經(jīng)2周的過渡,植株又恢復(fù)生長,葉片逐漸轉(zhuǎn)綠。當(dāng)抽出新葉時,便可移植于大田。

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