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夜香樹的組織培養(yǎng)
夜香樹又名洋素馨、夜來香、夜丁香，屬于茄科夜香樹屬。常綠灌木．高l一3m。枝條細長而稍彎垂。葉互生，長圓狀披針形或狹長圓形，長6～16cm，紙質，全緣，頂端漸尖．基部近圓形�；〝�(shù)多．排成疏散分枝的聚傘花序腋生或頂生；花冠高腳碟狀，長約2cm．綠色或黃綠色，檐部5淺裂，夜間極香，故名夜香樹。漿果橢圓形，直徑5～7mm。熟時白色；具種子l~6粒(多數(shù)為2~3粒)，長卵形或一側壓扁，直徑1~2mm，黑褐色。干粒重6．45g。夜香樹原產南美洲。我國福建和云南有栽培。性喜溫暖氣候。畏寒，喜光．在半陰處亦能適應；較粗生，在沙土上也能生長，但以疏松濕潤的沙土壤或壤土生長良好。萌芽力強�；ㄆ�7一11月．入夜散發(fā)濃郁香氣；果期冬春季，種子2—3月成熟。夜來香樹條細長，夏秋開花．黃綠色花朵傍晚開放．飄出陣陣撲鼻濃香．在南方多用來布置庭院、窗前、塘邊和亭畔。鑒于目前夜香樹的扦插繁殖耗費大量的原始材料和時間．不適于大規(guī)�；a。組織培養(yǎng)技術的發(fā)展為植物的生長繁殖開辟了一條新的途徑。培養(yǎng)路線：培養(yǎng)壯苗生根；放風鍛煉幼苗；出瓶移栽。直接采用小拱棚大田一步移栽的方式．可獲得性狀優(yōu)良的大量種苗。
l材料和方法
1．1材料
原始材料為植物光照實驗室盆栽夜香樹．選取生長發(fā)育良好的母株休眠芽枝段．剪成5~6cm莖段作為組織培養(yǎng)研究的外植體。
1.2實驗方法
基本培養(yǎng)基：實驗采用MS培養(yǎng)基．其中附加不同細胞分裂素(6一BA)和生長素(NAA、IBA)。所有培養(yǎng)基中激素單位為mg／L，pH值5．8—6．0，瓊脂0．6％。
外植體處理：將外植體用自來水沖洗30min．然后在超凈工作臺上剪成1．5～2．0cm的帶芽莖段．采用2次滅菌法．即先用70％的酒精滅菌34s．再用0．1％升汞溶液消毒8min．然后用無菌水沖洗5次，接種于誘導培養(yǎng)基上。
培養(yǎng)條件：培養(yǎng)室溫度為22+20C。以日光燈為主光源。光照時間14h／d。光照強度為2500—3000lx。
最佳誘導和生根培養(yǎng)基的篩選：通過添加不同的生長調節(jié)物質(6一BA、NAA和IBA)．叢生芽誘導處理見表l，芽分化誘導處理見表2。生根培養(yǎng)：從繼代培養(yǎng)材料中選取3.0~5.Ocm的有效芽苗．切成1.0~1.5cm的莖段。轉入l/2MS+1.5％蔗糖+0．6％瓊脂為基本培養(yǎng)基．在附加不同濃度IBA情況下進行生根實驗(表3)。一定要去除基部的葉子，因為基部的葉子一經(jīng)接觸培養(yǎng)基就會逐漸變硬、拱起和蜷縮，且極易發(fā)根。從而影響正常生根和生長。比較其各階段芽萌發(fā)、增殖系數(shù)、生根率等數(shù)據(jù)。篩選出最佳組合。
2結果與分析
2.1叢生芽誘導
這一階段主要是誘導芽，在外植體初代培養(yǎng)8-10d．部分外植體芽開始膨大。14d后相繼出現(xiàn)新芽；培養(yǎng)24d后新芽可長至2．0~3．8cm，生長情況見表l。
從表l可以看出。Ⅱ、Ⅳ這三個處理均有較高的出芽率．其中以處理Ⅱ即MS+6一BA0．5+NAA0．1芽萌發(fā)情況最好．芽粗壯．葉大且舒展．平均伸長3．5cm；處理I不添加生長調節(jié)物質，長勢較整齊，但芽的萌發(fā)較慢，新芽葉片小且蜷縮．平均伸長1．5cm;處理Ⅲ芽萌發(fā)情況不好，玻璃化情況嚴重。處理Ⅳ芽萌發(fā)情況亦可，平均伸長2．7cm，但葉片小，不舒展，長勢較弱。因此，Ⅳ雖有較高的出芽率，但新芽長勢不好。不適宜作為繼代材料使用。處理Ⅱ既有較高的出芽率且新芽長勢又好，是較適宜的初代培養(yǎng)基。
2．2芽分化誘導培養(yǎng)
芽分化增殖過程是夜香樹離體快速繁殖培養(yǎng)過程中一個非常重要的環(huán)節(jié)。獲得無菌材料后，是否能順利進入快速增殖培養(yǎng)階段。篩選出符合要求分化增殖培養(yǎng)基是此階段的主要任務．對于離體快速繁殖最終是否能應用于生產時間．受兩個關鍵因素制約：(l）芽的增殖率、芽的增殖速度是離體快速繁殖中的重要環(huán)節(jié)，直接關系到能否商業(yè)化生產；(2）有效芽所占比例，指可作為繼代材料或生根材料的芽占全部芽的百分率。此時芽的質量決定了芽的利用率的高低，所以選擇一個增殖率高且有效芽多的增殖培養(yǎng)基是離體快速繁殖的關鍵。
將第一階段培養(yǎng)成功的芽切下，接種于分化增殖培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，6一BA、IBA分別設了5個梯度，共50個處理，培養(yǎng)25d。對生長情況（表2）分析可知，芽增殖用6-BAO.5mg/L、IBAO.2mg/L時，芽增殖倍數(shù)為7.5，芽苗生長正常，節(jié)間略長，但有利于繼代繁殖。所以確定選取增殖倍數(shù)在5一6的分化增殖培養(yǎng)基，既符合增殖效果又符合得到健壯有效苗雙重標準的處理為6-BA0.4~0.5mg/L，IBAO.2一0.3mg/L。
2.3生根培養(yǎng)
由表3分析可知，經(jīng)過30d的生根培養(yǎng)，不同濃度IBA對夜香樹生根率、生根數(shù)均有不同程度的影響，其中以IBAO.3mg/L時生根情況最好，生根率高，發(fā)根早。有4一5條側生根。當IBAO.5mg/L時發(fā)現(xiàn)，有些根生長在植株基部愈傷組織上，根粗壯，側根多，但從苗瓶中取出移栽時根容易脫落，成活率不高。實驗還表明，夜香樹生根快慢與生根質量不僅受培養(yǎng)基的影響，而且與生根材料的健壯程度與木質化程度有密切關系。粗壯、半木質化材料生根快，主根與側生根發(fā)育好（表3）。
2.4煉苗與移栽
夜香樹試管苗在組培室內濕度比較恒定、無菌條件下產生出來的，因此，沒有經(jīng)過抗冷、抗熱、抗早或抗病等因素的煉苗，當移栽、種植到小棚或溫室栽培后往往會受到各種不利因素的影響，所以，在種植后7d應及時噴灑殺菌劑，每隔7一10d噴1次。常用殺菌劑有多菌靈、瑞毒素、波爾多液，濃度掌握在l000~1500倍為宜。
生根培養(yǎng)28d后，當瓶內組培苗長到scm左右時，將生根的瓶苗移人自然光下光培養(yǎng)7d后揭膜。為減少取苗時對根系的傷害，在拔苗前適當往瓶中加人一些自來水浸泡l一2h，將苗拔出后用自來水沖去附著的根部的瓊脂，移栽到用蒸汽消毒過的細煤渣或細沙中，成活率可達92腸以上。在煉苗床上培養(yǎng)15~20d移人大田或容器中。
3苗期管理
移植后每天淋水兩次，淋水時注意不要用膠管或噴槍直射、直淋，最好用噴霧方式淋水。因為試管苗幼小，直射、直淋都會造成植株歪斜。生長初期7d噴施氮肥兩次，21d后加少許磷、鉀肥，棍合施用�；ê髮⒖葜瓦^密枝條剪除．對徒長進行截短處理。常見病害有輪紋病，可用50％甲基托布津可濕性粉劑500倍液噴灑。蟲害有介殼蟲和粉虱，用50％殺螟松乳油1000倍液噴殺。
4結論
Ms+6-BAo.5mg/L+NAA0.lmg/L＋蔗糖3.0%＋瓊脂0.6％是夜香樹較為理想的誘導芽萌發(fā)的培養(yǎng)基；芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L，IBA0.2mg/L＋蔗糖3%＋瓊脂0.6%，繼代培養(yǎng)25d增殖系數(shù)可達7.5，且生長健壯。
在1/2MS+IBAO.3mg/L十蔗糖0.15％十瓊脂0.6％的培養(yǎng)基上，夜香樹生根效果較好，生根率達到100%，平均根數(shù)為5.7。在夜香樹移栽煉苗的過程中要嚴格控制空氣相對濕度，實驗過程中發(fā)現(xiàn)夜香樹瓶苗極易失水皺縮，煉苗前10d空氣相對濕度都應該保持在80％以上，最好是通過扣玻璃瓶或塑料薄膜來保持濕度。
夜香樹的花香過于濃郁，近距離聞其香氣易使人引起頭暈或不舒服的感覺。故只可在公園或庭院的空曠處種植，且數(shù)量不宜過多過密。
5討論
在試管苗生根培養(yǎng)中，耗費了大量的時間和培養(yǎng)空間，而采用試管苗瓶外生根不僅可以減少一次無菌操作的步驟，提高了培養(yǎng)空間，又簡化了組織培養(yǎng)程序，降低了生產成本，提高了繁殖系數(shù)，能進一步解決工廠化育苗的難題。因此是一項值得研究的技術之一。
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