蘭花的組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)是先進(jìn)的無(wú)性繁殖方法。取用植物器官或組織的一小部分，脫離母體而加以培養(yǎng)，經(jīng)過誘導(dǎo)和分化，使它再生成獨(dú)立的新植株。也稱為外植體培養(yǎng)。
早在1902年，德國(guó)植物學(xué)家哈巴蘭特預(yù)言：“植物細(xì)胞具有全能性，每個(gè)細(xì)胞都像胚胎細(xì)胞那樣，可以經(jīng)過體外培養(yǎng)成為一個(gè)完整的植株�！痹谶@個(gè)假說(shuō)指引下，法國(guó)科學(xué)家戈第勒和諾貝庫(kù)特用小塊的胡蘿卜根，于1938年成功地在試管中用培養(yǎng)基培養(yǎng)出愈傷組織。1939年，美國(guó)科學(xué)家懷特用煙草莖段形成層進(jìn)行組織培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)，也獲得成功。他們的工作為植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。1949年，美國(guó)斯庫(kù)格在1960年獲得成功的。他利用莖尖培養(yǎng)的目的是想除去蘭屬植物上的病毒，他得到了無(wú)病毒的幼苗。他發(fā)現(xiàn)蘭屬莖尖培養(yǎng)，可逐漸增大而形成類原球莖體，與蘭花胚胎正常發(fā)育相似、經(jīng)過分割，重復(fù)培養(yǎng)可以大量增殖、按照理論計(jì)算，l個(gè)外植體在1年之內(nèi)可產(chǎn)生400萬(wàn)株苗之多。從此，組織培養(yǎng)技術(shù)被應(yīng)用于蘭花的繁殖，刀多年來(lái)形成了蘭花的工廠化、商品化的生產(chǎn)。
目前，蘭花的各個(gè)部位，各個(gè)器官，即根、莖、葉、芽、花序、幼胚等都可以作為外植體進(jìn)行培養(yǎng)。
組織培養(yǎng)要有必要的設(shè)備和比較高的技術(shù)措施。首先要有培養(yǎng)室、無(wú)菌接種室及各種培養(yǎng)用具、用品等。在培養(yǎng)時(shí)要先配制培養(yǎng)基，剝?nèi)⊥庵搀w，然后消毒、接種、轉(zhuǎn)移，最后試管苗移植等，都需要比較復(fù)雜和細(xì)致的技術(shù)�，F(xiàn)將組織培養(yǎng)的方法簡(jiǎn)介如下。
培養(yǎng)基的配制
培養(yǎng)基是用各種不同成分和劑量的元素，加上各種維生素、激素等制成。蘭花種類不同，培養(yǎng)基的成分也有所不同。大多數(shù)的培養(yǎng)基是用固體或半固體的，也有用液體培養(yǎng)的，在液體中培養(yǎng)則需特殊的通氣方法，如常用的離心機(jī)或轉(zhuǎn)動(dòng)機(jī)，不停地將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)動(dòng)。
培養(yǎng)基須包括礦物質(zhì)、糖、維生素及生長(zhǎng)激素。在實(shí)際中用得最多的是MS培養(yǎng)基，或在此基礎(chǔ)上加添少數(shù)激素。MS培養(yǎng)基的成分如下：
成分用量
NH4NO3硝酸銨400
Ca2•4H2O硝酸鈣144
KNO3硝酸鉀80
KH2PO4磷酸二氫鉀125
MgSO4•7H2O硫酸鎂72
KCL氯化鉀65
NaFe—EDTA螫合鐵25
H3BO3硼酸16
MnSO4•4H2O硫酸錳65
ZnSO4•7H2O硫酸鋅27
KI碘化鉀0.75
IAA吲跺乙酸2
Kinetin激動(dòng)素0.04—0.2
Thiamin維生素B10.1
Nicotinicacid煙酸0.5
Pyridoxine維生素B60.5
Glycine甘氯酸2
Myo—inositol肌醇100
Casein—hydrolysate水解酪蛋白1000
Sugar蔗糖2%
瓊脂l％
蒸餾水1000ml
PH值為5.0-6.0
配制培養(yǎng)基要在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行，各種用具、玻璃瓶或試管，都要嚴(yán)格消毒殺菌。最后配成的培養(yǎng)液注入玻璃瓶或試管內(nèi)，再進(jìn)行消毒，冷卻后接入蘭花外植體。接種工作應(yīng)在無(wú)菌接種室或超凈工作臺(tái)上完成。
接種方法
1采取莖尖
蘭屬植物的組織培養(yǎng)以莖尖為最常用的材料。莖尖是分生組織最為活躍的生長(zhǎng)點(diǎn)。選擇健壯植株，將外層的葉和鞘葉剝?nèi)�，把整個(gè)莖尖切下，浸入2.5％的漂白粉溶液或7％的次氯酸鈉溶液中15—20分鐘。然后取出用蒸餾水沖洗5—6次，將消毒液沖洗十凈。在顯微鏡或擴(kuò)大鏡下將莖尖的生長(zhǎng)點(diǎn)挑出，并即刻接種到玻璃管培養(yǎng)基上。
2.培養(yǎng)原球體
生長(zhǎng)點(diǎn)一般經(jīng)過4-6周的培養(yǎng)，產(chǎn)生出小而圓的原球體。將原球體取出，重新分切，l分為4，再入培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，經(jīng)l—2個(gè)月又可長(zhǎng)出原球體。同樣，再行分割；重新培養(yǎng)。在幾個(gè)月之內(nèi)，就會(huì)獲得大量的原球體。
3分化培養(yǎng)
把切割的原球體放在液體培養(yǎng)基中，放在旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)床上進(jìn)行旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)。當(dāng)其小塊組織稍為長(zhǎng)大后，轉(zhuǎn)接在分化的培養(yǎng)基上，讓它分化根和芽。
4.試管苗移植
當(dāng)原球體組織分化根和芽，逐漸長(zhǎng)大之后，就成為幼小植株。經(jīng)一段培養(yǎng)，生長(zhǎng)到一定程度就應(yīng)該從玻璃瓶或試管中取出，移植到土壤或基質(zhì)中了。移出試管后，用自來(lái)水將根上的培養(yǎng)基輕輕沖洗干凈。栽培基質(zhì)一般用水苔或蛭石。栽植后移入溫室內(nèi)培養(yǎng)。
在組織培養(yǎng)中要經(jīng)過兩個(gè)關(guān)：第一個(gè)關(guān)是分化培養(yǎng)基的生長(zhǎng)激素和劑量，能否分化根和芽，完全取決于它。用什么激素和什么劑量，每種蘭花都不一樣，要經(jīng)過摸索試驗(yàn)才能掌握�？梢栽O(shè)計(jì)幾種配方，進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)來(lái)確定。第二個(gè)關(guān)是試管苗移出瓶后，往往不適應(yīng)外界環(huán)境而大批死亡。要?jiǎng)?chuàng)造良好條件，在精心管理之下，才能獲得良好結(jié)果。

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