莖尖培養(yǎng)

2010/12/15 20:08:40

蘭花莖尖培養(yǎng)多從生長的植株上切取3～20毫米的莖，去掉苞片，用水沖洗干凈后，放入75％酒精中浸泡數秒，取出，轉入加有吐溫-20的漂白粉清液中浸泡約10分鐘，再用無菌水沖洗2～3次，置消毒濾紙中吸干水分。然后在無菌條件下，用解剖刀將外表的幼葉剝掉，切取0．5～0．8毫米大小的芽，接種在固體培養(yǎng)基上，保持室溫23～24C，并給予1500～2000勒克斯、每天12～14小時的光照，誘導原球莖發(fā)生。常用的培養(yǎng)基為MS和BS培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中一般不使用2，4-二氯苯氧乙酸，而常加人10％的椰子汁、帶乙酸0．5～1．0毫克／升和6-芐基嘌呤0．1～1．0毫克／升。有條件的單位，應盡量使用液體振蕩培養(yǎng)，水平振蕩可快些，而立體振蕩應慢些，一般每分鐘2次即可。若無振蕩設備，可手動每天振蕩2～3次。振蕩不僅有利于原球莖球狀體形成，也有沖洗周圍組織的作用，防止組織的老化與枯死。通常在接種后不久，生長點組織先呈綠色，接著生長莖葉，以后在生長點基部的組織開始肥大，形成原球莖。原球莖可以不斷分割繼代培養(yǎng)，加速繁殖，直至達到所需的個數為止，然后再轉入分化培養(yǎng)。此時培養(yǎng)基中離子濃度應調低些，約15～20毫克／升較好，或在分化培養(yǎng)基中加人椰子汁等天然物質，原球莖便會很快再生成植株。而再分化的個體必須移人大的培養(yǎng)器內，繼續(xù)培養(yǎng)3～6個月，直至小苗有3～4片葉、3～4條根、高3～10厘米時才能移出，并將根部瓊脂清洗干凈后，栽入泥炭或蛭石中，但要注意保濕和弱光，并定期澆水施肥，促進生長。

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