1 植物材料 蝴蝶蘭Lm品種的幼葉。
2 培養(yǎng)條件 誘導培養(yǎng)基:MS+BA3.0+NAA0.2。繼代培養(yǎng)基:MS+BA2.0+NAA0.5。在上述培養(yǎng)基中均加入蔗糖20g/L,瓊脂12g/L,椰汁200mL/L。育苗培養(yǎng)基:1/2MS+IBA1.5+NAA0.05,并加入蔗糖20g/L,瓊脂12g/L,活性炭5g/L,椰汁200mL/L。培養(yǎng)溫度25℃-28℃,每日光照10h-12h,光照強度1600lx-2000lx。
3 培養(yǎng)方法與生長分化情況
3.1 外植體接種 從蝴蝶蘭植株上取下幼葉,放在自來水下沖洗干凈,然后放入燒杯內(nèi)待用。在超凈工作臺上,將燒杯內(nèi)的葉片用75%酒精消毒30s,然后用無菌水清洗2-3遍,再用0.1%升汞溶液浸泡11min,最后用無菌水沖洗4-5遍。用無菌手術(shù)刀將葉片切成5mmx5mm見方的小塊,平放或按極性接種在誘導培養(yǎng)基上,近軸面向上,每瓶不宜接種太多。
3.2 原球莖的誘導與增殖 幼葉切塊在誘導培養(yǎng)基上培養(yǎng)1-2月后,從每個葉片組織塊上產(chǎn)生1-7個不等的原球莖,此時,在無菌條件下,將原球莖取出切割成幾小塊,轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中,進行增殖培養(yǎng)。培養(yǎng)一段時間后,再進行分割轉(zhuǎn)移,通過這種方式,原球莖可成倍增長。
3.3 小植株的培養(yǎng) 將不需繼代的原球莖轉(zhuǎn)移到育苗培養(yǎng)基上分化出芽,并逐漸發(fā)育成叢生小植株。在無菌條件下,切開叢生小植株,將小植株轉(zhuǎn)入育苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)。不久,小植株生根,當小植株長到一定大小時,移入溫室。切離叢生小植株時,基部未分化的原球莖及剛分化的小芽應接入誘導培養(yǎng)基中,作為種苗。一段時間后,將長大的種苗移出,種植,小苗及原球莖可繼續(xù)增殖與分化。
3.4 移栽及管理 當小植株長至4cm左右,葉3-4片,根2-3條時,即可移栽。將小植株帶瓶移入溫室2周左右,然后打開瓶塞煉苗3-5d,取出苗后,用水沖洗掉植株根部的培養(yǎng)基,將根部放于70%甲基托布津溶液中消毒4h,藥液濃度為1500倍。將苗吸干水分后陰晾1h,然后定植于水苔育苗盤中。剛定植的植株應遮光50%左右 ,溫度控制在18℃-28℃,濕度以80%-90%為宜,以后逐漸保持在70%左右。緩苗后逐步提高光照強度至6000lx-8000lx。蝴蝶蘭根部忌積水 ,喜通風和干燥,水分過多,易引起根系腐爛。剛出瓶的小苗應勤補水,中苗或大苗根據(jù)干濕程度澆水,一般7d(天)-10d左右,基質(zhì)變干,盆面發(fā)白時,宜澆水,澆水時要讓整個植料濕透。
4 小結(jié) 在蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)過程中,葉齡與成功率密切相關(guān),取葉的實生苗年齡以3-4月為最好,其誘導率及每個外植體上的原球莖個數(shù)最高。葉切段大小與誘導率直接相關(guān),切段太小,存活率低,以0.5cm左右為最好。此外,出苗時間應掌握在春季為好,且在移栽初期的適時遮陰極其重要,培養(yǎng)條件溫度不宜超過28℃。