組培苗污染原因分析

2010/12/15 20:08:40

現(xiàn)在許多科研單位和花木生產企業(yè)都已配置了組織培養(yǎng)室。組培技術已成為重要的生物技術之一。然而有的組培室組培苗的數(shù)量和質量卻一直沒有質的飛躍，究其原因，最主要的因素就是污染所造成的。被污染后首先是生產成本的提高；其二，對植株造成傷害；其三，增加接種源受污染的機率。

　　常見污染源

　　組織培養(yǎng)過程中的污染源主要有以下幾種：戶外風大，菌類進屋機會多。有風就有沙，有沙就有塵，有塵就有菌，菌塵共存，這是菌類進屋的主要原因之一。屋內太潮，菌類繁衍多。需保持室內空氣干燥，如使用空調“除濕”功能，也可減少真菌生長繁殖。人員帶菌多。在整個操作室內，人員可說是最大的帶菌者，不管在毛發(fā)或是衣服等地方，都隱藏著數(shù)不清的菌類。在進入操作室前，最好能對作業(yè)人員進行清潔處理，比如換上干凈的白大褂，換上實驗室的鞋，衣服鞋每星期洗一次，上超凈臺前手要用肥皂清洗兩遍，接種前手再用酒精擦拭一遍。屋內不干凈。紫外線能殺滅或抑制真菌生長，因此應在每次接種前進行20分鐘的紫外燈消毒。清理屋內帶菌組培苗。在植物病害中，真菌所引起的病害尤其嚴重，且因會產生孢子，隨著空氣飄散。一旦落入適當?shù)沫h(huán)境下，一粒小小的孢子便會擴大成一個菌落，污染整個組織培養(yǎng)瓶。因此一旦有真菌污染的組培苗，就要用高壓滅菌器徹底消滅，以防擴散。接種不正確。不正確操作也會增加污染機率，如開蓋太快，滅菌不夠，操作過慢等。接種過程應該輕開蓋，快操作。

　　污染原因及污染苗搶救

　　若污染菌類是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，比如培養(yǎng)基滅菌不徹底；超凈工作臺長時間不換濾網(wǎng)，致使凈化能力降低；接種用具滅菌不徹底；操作不正確，動作生硬緩慢，開瓶時間太久，接種臺擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內；接種室長期不滅菌，菌類太多等。

　　若污染菌類是從材料周圍長起，則可證明是植物材料帶菌引起�？赡苁墙臃N用具滅菌不徹底，接種時材料被污染；或者是未及時發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過程交叉感染等。

　　若菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，而不是從培養(yǎng)基先長起，且發(fā)生在5天以后，則說明是材料帶的內生菌。若從培養(yǎng)基以下開始長菌，發(fā)生時間較早，且有從里向外的趨勢，則說明是切口引起的污染，原因可能是滅完菌后，未剪去兩個切口或雖剪但器具帶菌。

　　真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經高壓滅菌后扔掉，即使僅形成菌絲也應處理后扔掉，因為菌絲能夠達到材料內部，因此，真菌污染是滅絕性的。如果是細菌污染，由于細菌繁殖是靠芽孢，細菌不會彌散在整個空間，因此只要及時發(fā)現(xiàn)，可將材料上部未感菌的部分剪下轉接，材料仍可以用。

　　用抗生素等殺菌藥劑進行處理，這種方式雖有不少報道，但至今還未發(fā)現(xiàn)那種抗生素能夠對各種菌都有效，并且也會影響植物材料的正常生長分化。還有一些藥劑雖然殺菌效果好，但往往容易引起鹽害，也無法利用。

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